SjGST和佐剂mIL-12及CpG对增强Sj14-3-3 DNA疫苗的保护作用

论文摘要

目的:从日本血吸虫（中国大陆株）成虫cDNA中扩增出日本血吸虫信号蛋白14-3-3（Sj14-3-3）和日本血吸虫26kDa谷胱甘肽-S-转移酶（SjGST）编码基因,扩增小鼠白介素-12（mIL-12）编码序列,克隆至真核表达载体pcDNA3.1（+）,并验证其能表达出重组蛋白;利用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,观察其对小鼠抗血吸虫感染的保护作用,以及对特异性IgG抗体、脾细胞分泌的细胞因子及CD4+和CD8+比率的影响。 方法:提取日本血吸虫成虫总RNA,纯化出mRNA,逆转录生成cDNA,以其为模板扩增出Sj14-3-3和SjGST编码基因,另从带mIL-12的质粒（pSEC:p30-p40）扩增出mIL-12编码基因,将扩增产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）。用RT-PCR、间接免疫荧光和Western blotting等方法验证其在体外（COS-7细胞）表达,制备无内毒素小鼠DNA疫苗,准备免疫小鼠。 BABC/c小鼠（6-8周龄,体重18-22g）随机分成5组,每组5只,雌雄兼用。除对照组外,每组均给予日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3.1（+）-Sj14-3-3 20μg/次/鼠,后腿肌肉注射（i.m.）,共免疫2次,

论文目录

• 中英文词汇对照表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 阳性钉螺
• 2.1.2 实验动物
• 2.1.3 质粒、细胞株
• 2.1.4 引物
• 2.1.5 试剂及来源
• 2.1.6 实验所用仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 Sj14-3-3，SjGST和mIL-12基因的构建、鉴定
• 2.2.2 重组质粒的转染和鉴定
• 2.2.3 DNA疫苗的制备及其免疫保护性的研究
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附录一
• 附录二（个人简历）
• 附录三（致谢）
• 附录四（综述）