HAP纳米粒子对肝癌细胞增殖及内质网影响的研究

论文摘要

纳米粒子对肿瘤细胞增殖的抑制作用是其本身的一种纳米生物学效应,也是生物中心多年来的研究课题。本论文围绕这一课题,利用均相沉淀法合成了羟基磷灰石（HAP）、掺锶磷灰石（Sr-HAP1）、锶钙磷灰石（Sr-HAP2）、二氧化钛（TiO2）四种不同成分的纳米粒子,还控制试验条件制备了四种不同粒径的羟基磷灰石（HAP）粒子,即HAP1、HAP2、HAP3和HAP4。利用MTT实验法筛选出了对Bel-7402肝癌细胞增殖抑制明显而对L-02肝细胞增殖抑制不明显,分散均匀,生物相容性好,可以在体内代谢的粒径在100nm以内的HAP1纳米粒子作为后期实验的材料基础。运用生长曲线法和集落生成率法检测三种不同浓度的HAP1纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞增殖的抑制作用和对细胞克隆原的抑制作用;借助倒置显微镜观察HAP1纳米粒子作用后Bel-7402肝癌细胞发生的形态变化;利用激光共聚焦扫描显微镜,通过荧光标记的手段,定性、定量的研究了HAP1纳米粒子作用前后Bel-7402肝癌细胞中内质网的变化。最后得出结论:1.HAP1纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞的增殖具有抑制作用,且这种抑制作用有剂量依赖和时间依赖性。2.不同浓度的HAP1纳米粒子作用后,Bel-7402肝癌细胞形成集落的能力明显下降,对照组的集落形成率为97.78±1.50%,而HAP1-1组、HAP1-2组、HAP1-3组的集落形成率分别为73.11±1.67%、40.89±2.16%、15.44±2.50%,HAP1-2组和HAP1-3组与对照组相比有显著差异（p<0.05）,形成集落的直径和面积上较对照组明显减小（p<0.01）。3.不同浓度的HAP1纳米粒子作用后,Bel-7402肝癌细胞内出现了多少不等的空泡,空泡间互相融合,最终导致细胞死亡。4.HAP1纳米粒子作用后,Bel-7402肝癌细胞中内质网的数量与分布发生变化,内质网的荧光强度值和平均荧光值都较对照组明显减少,推测HAP-1纳米粒子通过影响Bel-7402肝癌细胞内质网结构和功能对细胞的转录产生影响,抑制蛋白质的合成,致使肿瘤细胞的代谢受阻,从而改变细胞的分化过程,影响肿瘤细胞的增殖或生存。

论文目录

• 摘要
• ABSTACT
• 目录
• 第1章 前言
• 1.1 纳米技术及其在医学中的应用
• 1.2 肝癌的研究现状
• 1.2.1 肝癌的发病因素
• 1.2.2 肝癌的诊断
• 1.2.3 肝癌的治疗
• 1.3 内质网概述
• 1.3.1 内质网的结构与功能
• 1.3.2 内质网分子伴侣
• 1.3.3 内质网应激
• 1.4 论文的选题
• 1.4.1 论文研究的目的、意义
• 1.4.2 论文的主要内容
• 第2章 敏感纳米粒子的筛选
• 2.1 无机纳米粒子的制备及特性
• 2.1.1 无机纳米粒子的制备
• 2.1.2 纳米粒子的平均粒径与粒径分布
• 2.2 肝癌细胞敏感的纳米粒子筛选
• 2.2.1 实验原理
• 2.2.2 材料
• 2.2.2.1 细胞
• 2.2.2.2 仪器与试剂
• 2.2.3 方法
• 2.2.4 结果
• 2.2.4.1 不同粒径的HAP粒子对Bel-7402肝癌细胞的作用
• 2.2.4.2 不同粒径的HAP粒子对L-02肝细胞的作用
• 2.2.4.3 不同成分的纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞的作用
• 2.2.4.4 不同成分的纳米粒子对L-02肝细胞的作用
• 2.3 讨论
• 第3章 HAP纳米粒子对BEL-7402肝癌细胞增殖抑制的研究
• 3.1 常用的检测细胞活力和生物活性的方法
• 3.2 实验
• 3.2.1.材料
• 3.2.2.实验方法
• 3.2.2.1 生长曲线测定
• 3.2.2.2 集落形成率测定
• 1纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞形态的影响'>3.2.2.3 HAP₁纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞形态的影响
• 3.2.3 结果
• 1纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞生长曲线的影响'>3.2.3.1 HAP₁纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞生长曲线的影响
• 1纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞集落形成的影响'>3.2.3.2 HAP₁纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞集落形成的影响
• 1纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞形态的影响'>3.2.3.3 HAP₁纳米粒子对Bel-7402肝癌细胞形态的影响
• 3.3 讨论
• 第4章 HAP纳米粒子对BEL-7402肝癌细胞内质网的影响
• 4.1 激光共聚焦扫描显微镜及其在抗肿瘤药物研究中的应用
• 4.1.1 激光扫描共聚焦显微镜的工作原理
• 4.1.2 激光扫描共聚焦显微镜的优越性
• 4.1.3 激光扫描共聚焦显微镜在抗肿瘤药物研究中的应用
• 4.1.3.1 药物分布
• 4.1.3.2 胞间通讯
• 4.1.3.3 胞内离子
• 4.1.3.4 其他
• 4.2 实验
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 方法
• 4.2.3 结果
• 4.3 讨论
• 第5章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录：研究生就读期间发表的论文