乳黄片对A型肝性脑病大鼠星形胶质细胞结构与蛋白的影响

论文题目: 乳黄片对A型肝性脑病大鼠星形胶质细胞结构与蛋白的影响

论文类型: 博士论文

论文专业: 中医内科学

作者: 陈军梅

导师: 张赤志

关键词: 肝性脑病,乳黄片,星形胶质细胞,实验研究

文献来源: 湖北中医学院

发表年度: 2005

论文摘要: 目的 A型肝性脑病(hepatic encephalopathy,HE)是急性肝功能衰竭并发的大脑功能障碍,该病来势凶险,生存率仅为20%。目前,氨中毒学说被公认为仍处于HE众多发病机制假说的中心地位。通常认为它是通过干扰脑的能量代谢引起HE的发生。近年来,国内外学者认为,氨导致星形胶质细胞结构功能失常,可能是HE发病的主要机理。祖国医学称本病为“肝厥”。根据中医理论与临床经验,导师张赤志教授认为本病病因病机为邪毒直犯肝脏,肝失疏泄,脾失健运,肠道传导失司,腑浊内生,化热生痰,上扰神明;病位在肝、心脑与胃;结合“肝与大肠相通,肝病宜疏通大肠”和“上病下治”治疗原则,立通下解毒法;选用酒制大黄和乳酸菌素组成乳黄片治疗HE,临床和前期动物实验均显示有很好的降氨作用,能明显改善HE症状与体征,提高存活率。为进一步明确乳黄片抗HE的作用位点与机制,本课题从动物和细胞实验两方面研究该药对星形胶质细胞结构和蛋白表达的影响。方法 (1)200±20gSPF级雄性Wistar大鼠96只,随机分为6组,每组16只:正常对照组(A组)、模型组(B组)、乳果糖组(C组)、乳黄片小中大剂量组(D、E、F组)。大鼠禁食过夜(14h以上),除A组外其余各组采用目前应用最成熟的硫代乙酰胺(TAA)诱导法(TAA250mg/kg灌胃两次,每次间隔24h)复制A型HE动物模型。在TAA首次造模前2h,A、B组每只大鼠灌胃生理盐水1ml/100g体重,其余各组给等体积/重量比的相应药物。以后每8h重复给药一次。自首次TAA造模至实验结束,每隔8h皮下注射3ml 10%葡萄糖、2ml含等量生理盐水与20μmol/lKCl溶液的混合液以防止低血糖。实验30h后行脑电图(EEG)检测,之后处置动物取材。实验过程中,密切观察大鼠行为学改变。(2)眼眶取血,检测血清ALT和血氨浓度。(3)伊文思蓝(EB)渗出法检测血脑屏障(BBB)通透性。透射电镜观察星形胶质细胞在内的BBB超微结构变化。(4)小脑延髓池处抽取脑脊液,检测脑脊液氨浓度。取大脑皮层组织,制成匀浆,高效液相色谱法检测谷氨酰胺含量。取整个脑组织,干湿重法检测脑组织含水量比。(5)免疫组织化学法观察大脑皮层组织星形胶质细胞结构蛋白-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。(6)半定量逆转录-多聚酶链法(RT-PCR)检测大鼠皮层脑组织谷氨酸转运体GLT-1mRNA的表达情况。(7)制备乳黄片脑脊液,作用暴露于5mM浓度氯化铵的星形胶质细胞CRL-2541 48h,MTT法检测其活性,免疫细胞化学法检测GFAP表达情况。结果 (1)乳黄片可明显改善A型HE大鼠行为异常和EEG变化,显著降低血清ALT与血氨水平(P<0.01),提高存活率;大、中、小剂量组疗效均优于乳果糖组,且以中剂量组最佳;(2)乳黄片能明显降低A型HE大鼠脑组织EB含量(P<0.01),显著改善星形胶质细胞在内的BBB超微结构受损情况,以中剂量组疗效最优;(3)乳黄片可显著降低A型HE大鼠脑脊液氨浓度、脑组织谷氨酰胺含量及脑含水量比(P<0.01),以中剂量组下降最明显;(4)乳黄片能显著上调A型HE大鼠大脑皮层组织星形胶质细胞GFAP的表达,升高湖北中医学院博士学位论文其阳性细胞数和平均光密度(P<0.01),以中剂量上升最显著;(5)乳黄片能明显上调A型HE大鼠大脑皮层组织星形胶质细胞上谷氨酸转运体GLT一lmRNA的表达,以中剂量上升最明显;(6)乳黄片脑脊液能显著升高smM浓度氨环境中星形胶质细胞CRL一2541的吸光度,上调GFAP的表达。结论(1)高氨是A型HE发病的病因基础之一,其对星形胶质细胞结构和蛋白的损害在HE的发病机理中占有重要作用。其中,氨及其代谢产物一谷氨酞胺的过量堆积可引起星形胶质细胞结构损害和GFAP蛋白表达缺失,导致血脑屏障完整性受损,通透性增加和血管源性脑水肿的发生;继发的谷氨酸转运体蛋白(如GLT一1)基因表达缺失,可导致谷氨酸大量积于突触间隙,引起神经元毒性和脑水肿的发生。(2)乳黄片有良好防治A型HE的作用,可能是通过以下途径实现的:保肝护肝,降低氨(血和脑脊液氨)与谷氨酞胺浓度,进入血脑屏障,改善星形胶质细胞结构受损与蛋白表达缺失情况。(3)乳黄片抗HE的作用位点可能为星形胶质细胞。关键词:肝性脑病/A型@乳黄片星形胶质细胞实验研究

论文目录:

一、中文摘要

二、英文摘要

三、缩略词表

四、前言

五、论文正文

实验一乳黄片对A型肝性脑病大鼠脑电图和血氨的影响

材料和方法

结果

讨论

实验二乳黄片对A型肝性脑病大鼠血脑屏障的影响

材料和方法

结果

讨论

实验三乳黄片对A型肝性脑病大鼠大脑皮层谷氨酰胺的影响

材料和方法

结果

讨论

实验四乳黄片对A型肝性脑病大鼠大脑皮层星形胶质细胞GFAP表达的影响

材料和方法

结果

讨论

实验五乳黄片对A型肝性脑病大鼠大脑皮层星形胶质细胞GLT-1mRNA表达的影响

材料和方法

结果

讨论

实验六乳黄片对高氨环境中的星形胶质细胞CRL-2541活力及GFAP表达的影响

材料和方法

结果

讨论

六、讨论与结论

七、文献综述

(一) 星形胶质细胞与A型肝性脑病

(二) 肝性脑病的治疗

八、在校期间发表论文

九、致谢

十、附图

发布时间: 2005-06-22

参考文献

[1].SLT对缺血缺氧损伤星形胶质细胞功能的影响及保护机制的研究[D]. 张业昊.中国中医科学院2018
[2].小檗碱对EAE小鼠星形胶质细胞SPHK1/S1P/S1PR1、3通路影响的研究[D]. 罗家明.重庆医科大学2018
[3].培养大鼠星形胶质细胞对拟脑缺血再灌注损伤神经元的作用和抗呆Ⅰ号的影响[D]. 宋岳涛.北京中医药大学2004
[4].多疣壁虎GFAP基因的克隆及其脊髓横断损伤后GFAP的表达变化[D]. 高德宏.华中科技大学2010
[5].龙胆苦苷镇痛与抗抑郁的中枢作用及机制研究[D]. 邓雅婷.第四军医大学2015
[6].助阳宁神方拮抗应激致抑郁小鼠海马星形胶质细胞可塑性损伤的作用研究[D]. 戴建国.南京中医药大学2012
[7].栀子苷的提取分离及药物调控神经病理性疼痛的实验研究[D]. 许丹.吉林大学2014
[8].中药神经保护作用的离体实验研究——“中药脑脊液药理学”实验方法的提出[D]. 梅建勋.天津中医学院2000
[9].肝郁脾虚证小鼠前额皮质星形胶质细胞功能变化及逍遥散的调节机制[D]. 刘燕.湖北中医药大学2016
[10].梓葛冻干粉针对大鼠急性脑缺血损伤半暗带神经血管单元的整体保护作用[D]. 薛强.西南大学2016

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