胰腺癌中RASSF2A启动子甲基化状态的检测及其临床病理意义

论文摘要

表观遗传学和遗传学的异常改变共同参与了肿瘤的发生。DNA甲基化是最常见的表观遗传学改变。胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤,早期症状不明显,对放疗和化疗不敏感,预后差。目前,胰腺癌的发病机制还不清楚。研究发现,从早期癌前病变PanIN到胰腺癌均有不同的表观遗传学改变。RAS在许多生命活动中发挥作用,比如调节细胞的增殖、迁移和凋亡。RAS通过和一些负效应调节子的相互作用,诱导衰老和凋亡。RASSF（RAS-associationdomain family）家族是最常见的RAS的负效应调节子。它们都是抑癌基因,在许多肿瘤中失活或者表达下调。RASSF2是RASSF家族的成员。它有3个转录本,仅RASSF2A的启动子区有CpG岛。RASSF2A以GTP依赖的方式与K-RAS直接结合,具有促进凋亡和细胞周期停滞、抑制生长的作用。RASSF2A主要抑制NF-κB的转录活性,抑制炎症因子的表达,从而抑制血管生成和肿瘤浸润。RASSF2A还可以抑制RAS-Rho通路。研究发现结肠癌、结肠腺瘤中RASSF2A启动子甲基化很常见。在肺癌、胃癌、乳腺癌、鼻咽癌、子宫内膜癌中也检测到RASSF2A启动子甲基化。但RASSF2A在胰腺癌中的甲基化状态目前未有相关报道。本实验应用real-time PCR技术检测了8株人胰腺癌细胞系和正常胰腺组织中RASSF2 mRNA表达水平。通过甲基化特异性PCR（Methylation specific PCR,MSP）方法检测了8株人胰腺癌细胞系、41例胰腺导管腺癌和29例癌旁正常胰腺组织中RASSF2A启动子的甲基化状态。复习总结41例胰腺导管腺癌的临床病理资料,分析RASSF2A启动子的甲基化状态与临床病理指标的关系。最后,分别以不同浓度去甲基化药物5-aza-2’-deoxycytidine（5-aza-dC）处理胰腺癌细胞系BxPC-3和AsPC-1,通过real-time PCR方法观察处理后不同时间点胰腺癌细胞系的RASSF2mRNA表达水平的变化。结果显示8株人胰腺癌细胞系中RASSF2 mRNA表达水平降低,其中以AsPC-1、BxPC-3和PANC-1的表达水平最低。MSP方法检测8/8（100%）胰腺癌细胞系的RASSF2A启动子均有完全甲基化。9/41（22%）胰腺导管腺癌组织有RASSF2A启动子甲基化,并且为不完全甲基化。29例癌旁正常胰腺组织中未检测到RASSF2A启动子甲基化。胰腺导管腺癌组织和癌旁正常胰腺组织的RASSF2A启动子甲基化的发生率具有统计学差异（P值＜0.01）。胰腺癌中RASSF2A启动子甲基化与病人的年龄、性别、肿瘤的组织学分级及淋巴结转移无关。5-aza-dC处理胰腺癌细胞系BxPC-3和AsPC-1后,恢复了RASSF2 mRNA表达,RASSF2 mRNA表达水平在第3天开始升高,尤以AsPC-1的改变为显著。这说明在AsPC-1和BxPC-3中,启动子甲基化是RASSF2 mRNA表达水平降低的主要原因。其他表观遗传学修饰,比如乙酰化也可能参与调控BxPC-3的RASSF2 mRNA表达。总之,胰腺癌细胞系中RASSF2 mRNA表达水平降低。胰腺癌中有RASSF2A启动子甲基化,而正常胰腺组织无RASSF2A启动子甲基化。RASSF2A启动子甲基化可能抑制了其转录,在胰腺癌的发生中可能起一定作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词
• 前言
• 技术路线
• 实验材料
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 个人简历