微生物油脂PUFAS微囊粉胶囊剂的药理学和毒理学研究

论文摘要

为了考察微生物油脂PUFAS微囊粉胶囊剂是否具有免疫调节的药理学作用以及安全性,对该制剂进行了药理学和毒理学研究。 在药理学研究中,经口分别给予三组小鼠0.45、0.90、1.40g/kg·bw三个剂量的该制剂连续30d,（1）检测体重、淋巴器官/体重比值:（2）采用MTT法进行ConA诱导的脾淋巴细胞转化试验:（3）采用耳肿胀法进行二硝基氟苯（DNFB）诱导的迟发型变态反应试验:（4）采用改良Jerne玻片法进行溶血空斑试验:（5）采用血凝法进行血清溶血素测定试验;（6）通过半体内法进行腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;（7）尾静脉注射墨汁法进行碳廓清试验。结果发现,与空白对照组相比,（1）该制剂对体重和淋巴器官/体重比值无明显影响（P>0.05）;（2）中、高剂量可显著和极显著增强脾淋巴细胞的增值能力（P<0.05,P<0.01,高剂量组的平均OD差值为0.041,对照组的平均OD差值为0.031）;（3）中、高剂量可显著和极显著加剧ConA诱导的迟发型变态反应（P<0.05,P<0.01,其中高剂量组的左右耳平均重量差为24.30mg,对照组左右耳平均重量差为20.13mg）;（4）中、高剂量可显著和极显著提高抗体生成细胞的能力（P<0.05,P<0.01,高剂量组的平均溶血空斑数为387个/106脾细胞,对照组的平均溶血空斑数为319个/106脾细胞）;（5）中、高剂量可显著和极显著增加溶血素水平(P<0.05,P<0.01,高剂量组的平均HC50为77.4,对照组的平均HC50为45.2);（6）中、高剂量可显著和极显著增强巨噬细胞吞噬功能（P<0.05,P<0.01,高剂量组的平均吞噬百分率和吞噬指数分别为34.5%和0.390,对照组的平均吞噬百分率和吞噬指数为27.5%和0.319）;（7）中、高剂量可显著和极显著增强碳廓清能力（P<0.05,P<0.01,高剂量组的平均碳吞噬指数为6.047±0.2,对照组的平均碳吞噬指数为5.372）。以上结果可证明,该制剂具有调节小鼠免疫功能的作用。 在毒理学研究中,参考卫生部颁布的《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行:（1）小鼠急性毒性试验;（2）遗传毒性试验（Ames试验、小鼠骨髓嗜多染微核试验和小鼠精子畸形试验）;（3）30d短期喂养试验。结果:（1）当SPF级昆明小鼠两次灌胃量达13.2g/kg·bw后二周,未见中毒症状和死亡;（2）Ames试验中,受试物对数伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株,在加与不加S-9时试验结果均为阴性;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验及小鼠精子畸形试验试验结果也均为阴性,说明受试物无遗传毒性。（3）受试物30天喂养对wistar大鼠的临床检查、血液学、生化学、脏器重量和系数以及病理学等指标无明显影响（P>0.05）。上述结果证明该制剂属实际无毒的产品、无致突变作用。 通过上述对微生物油脂PUFAS微囊粉胶囊剂的药理学和毒理学研究,考察了该制剂

论文目录

• 第一章 文献综述
• 1. 研究目的与意义
• 2 微生物油脂的发展概况
• 3 PUFAS的功能
• 3.1 多不饱和脂肪酸在细胞膜中的作
• 3.2 多不饱和脂肪酸在基因表达中的作用
• 3.3 多不饱和脂肪酸与生物活性物质的关系
• 3.4 多不饱和脂肪酸的疾病预防及保健功能
• 4 产脂（PUFAS）的微生物种类和特点
• 4.1 微生物多不饱和脂肪酸的合成途径
• 4.2 产脂微生物的种类
• 4.2.1 细菌
• 4.2.2 酵母
• 4.2.3 霉菌
• 4.2.4 微藻
• 4.3 产脂微生物的油脂组成特点
• 4.3.1 一些真菌的生物量和油脂组
• 4.3.2 藻类的油脂组成特点
• 4.4 筛选和选育高产油脂菌种
• 4.5 利用微生物生产油脂的优点
• 第二章 微生物油脂PUFAS微囊粉胶囊剂药理学（免疫调节）作用研究
• 1 试验原理
• 1.1 T细胞的功能检测
• 1.1.1 ConA诱导的小鼠肝淋巴细胞转化试验
• 1.1.2 迟发型过敏反应（DTH）
• 1.2 B细胞功能检测
• 1.2.1 溶血空斑试验
• 1.2.2 血清溶血数的测定
• 1.3 吞噬细胞功能检测
• 1.3.1 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验
• 1.3.2 小鼠碳廓清实验
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 样品
• 2.1.2 实验动物
• 2.1.3 试剂
• 2.1.4 仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 分组与给药方法
• 2.2.2 测定试验前后动物的体重
• 2.2.3 测定动物淋巴器官/体重的比值
• 2.2.4 ConA诱导的小鼠肝淋巴细胞转化试
• 2.2.4.1 试剂的配制
• 2.2.4.2 脾细胞悬液的制备
• 2.2.4.3 淋巴细胞增殖反应
• 2.2.4.4 数据处理及结果判定
• 2.2.5 二硝基氟苯（DNFB）诱发迟发型变态反应（DTH）
• 2.2.5.1 试剂配制
• 2.2.5.2 致敏
• 2.2.5.3 DTH的产生与测定
• 2.2.5.4 数据处理与结果判定
• 50)'>2.2.6 血清溶血素水平的测定(HC₅₀)
• 2.2.6.1 试验步骤
• 2.2.6.2 数据处理与结果判定
• 2.2.7 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
• 2.2.7.1 试剂的配制
• 2.2.7.2 操作步骤
• 2.2.7.3 数据处理与结果判定
• 2.2.8 小鼠碳廓清试验
• 2.2.8.1 操作步骤
• 2.2.8.2 数据处理与结果判定
• 2.2.9 溶血空斑试验（抗体生成细胞）试验
• 2.2.9.1 操作步骤
• 2.2.9.2 数据处理与结果判定
• 3 结果
• 3.1 试验前后动物体重比较
• 3.2 对动物淋巴器官/体重比值的影响
• 3.3 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验
• 3.4 二硝基氟苯（DNFB）诱导迟发型变态反应（DTH）
• 3.5 血清溶血素的测定
• 3.6 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
• 3.7 小鼠碳廓清试验
• 3.8 溶血空斑（抗体生成细胞）试验
• 4 结论
• 第三章 微生物油脂PUFAS微囊粉胶囊剂的毒理学研究
• 1 试验原理
• 1.1 急性毒性试验
• 1.2 遗传毒性试验
• 1.2.1 Ames实验
• 1.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验
• 1.2.3 小鼠精子畸形试验
• 1.3 短期喂养试验
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 样品及处理
• 2.1.2 动物品种及来源
• 2.2 方法
• 2.2.1 小鼠急性毒性试验
• 2.2.2 遗传毒性实验
• 2.2.2.1 Ames试验
• 2.2.2.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验
• 2.2.2.3 小鼠精子畸形试验
• 2.2.3 30天喂养试验
• 2.2.3.1 一般临床症状
• 2.2.3.2 体重和食物利用率
• 2.2.3.3 血常规检测和生化指标测定
• 2.2.3.4 脏器重量和脏器系数
• 2.2.3.5 病理组织学检查
• 3 结果与分析
• 3.1 昆明小鼠急性毒性实验
• 3.2 遗传毒性实验
• 3.2.1 Ames试验结果
• 3.2.2 昆明小鼠骨髓嗜多染红细胞数微核实验
• 3.2.3 昆明小鼠精子畸形试验
• 3.3 30天喂养试验
• 3.3.1 动物一般表现
• 3.3.2 对wistar大鼠体重的影响
• 3.3.3 对wistar大鼠食物利用率的影响
• 3.3.4 血液学检查结果
• 3.3.4.1 对wistar大鼠血常规的影响
• 3.3.4.2 对wister大鼠白细胞分类的影响
• 3.3.5 对wister大鼠血生化检查的影响
• 3.3.6 对wister大鼠脏器重量及系数的影响
• 3.3.7 病理组织检查
• 4 结论
• 5 致谢
• 参考文献
• 作者简介