GSH对小鼠卵母细胞体外成熟体外受精的影响

论文摘要

随着胚胎工程技术在人类辅助生殖领域和家畜繁殖领域中的应用,科研工作和商业活动需要大量的优质胚胎。卵母细胞经体外成熟（In Vitro Maturation, IVM）和体外受精（In Vitro Fertilization, IVF）后能够提供大量胚胎。但与体内胚胎相比,体外胚胎质量一直是困扰胚胎体外生产的主要问题,这严重影响了体外受精和动物克隆技术的实际应用。在影响卵母细胞体外成熟和体外受精的诸多因素中,活性氧自由基（Reactive Oxygen Species, ROS）是降低卵母细胞体外成熟质量和受精后胚胎发育能力的主要因素之一。谷胱甘肽（Glutathione, GSH）作为卵母细胞成熟受精过程中最重要抗ROS物质,能够提高卵母细胞成熟受精后的胚胎质量。本实验研究了三种硫醇类物质:半胱氨酸、胱氨酸和β-巯基乙醇对卵母细胞GSH合成的影响;或在精子获能和体外受精过程中给予足够剂量的GSH以提高卵母细胞成熟受精后胚胎质量的效果。实验结果显示:1.半胱氨酸和胱氨酸能够促进小鼠体外成熟卵母细胞合成GSH,提高体外受精后胚胎发育能力和囊胚细胞数,这种提高具有浓度依赖性。胱氨酸的最佳浓度为200μM。更高浓度时会降低胚胎质量。2.小鼠卵母细胞体外成熟液中添加β-巯基乙醇能够促进GSH合成,在200μM时才能够显著提高胚胎发育能力。更高浓度时则会起相反作用。3.在精子获能液中添加GSH能够提高获能效率继而提高小鼠精子的受精能力,这种提高依赖GSH的浓度。4.在小鼠体外受精液中添加GSH,能够显著提高受精率、囊胚率,并且这种提高依赖于GSH浓度。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 引言
• 1.1 卵母细胞成熟
• 1.1.1 卵母细胞成熟过程
• 1.1.2 卵母细胞体外成熟
• 1.1.3 卵母细胞成熟特征
• 1.2 自由基
• 1.2.1 动物机体中的自由基
• 1.2.2 自由基的代谢
• 1.2.3 自由基与DNA 损伤
• 1.3 谷胱甘肽
• 1.3.1 谷胱甘肽的生物学作用
• 1.3.2 精子中的谷胱甘肽
• 1.3.3 卵母细胞中的谷胱甘肽
• 1.3.4 硫醇类物质与卵母细胞谷胱甘肽的合成
• 1.3.5 GSH 对受精的影响
• 1.3.6 哺乳动物卵母细胞成熟受精后GSH 水平变化
• 1.4 本实验研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物
• 2.2 主要仪器和设备
• 2.3 主要试剂和配制
• 2.3.1 主要试剂
• 2.3.2 液体配制
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 卵母细胞体外成熟
• 2.4.2 体内成熟MⅡ期卵母细胞获取
• 2.4.3 成熟卵母细胞GSH 浓度检测
• 2.4.4 精子准备和获能
• 2.4.5 体外受精
• 2.4.6 囊胚细胞计数
• 2.5 实验设计
• 2.6 数据处理
• 3 结果
• 3.1 成熟液中添加半胱氨酸、胱氨酸和Β-巯基乙醇对体外受精的影响
• 3.1.1 成熟液中添加半胱氨酸对体外受精的影响
• 3.1.2 成熟液中添加胱氨酸对体外受精的影响
• 3.1.3 成熟液中添加β-巯基乙醇对体外受精的影响
• 3.1.4 添加半胱氨酸、胱氨酸和β-巯基乙醇对体外成熟卵母细胞GSH 含量的影响
• 3.1.5 添加半胱氨酸、胱氨酸和β-巯基乙醇对卵母细胞体外成熟受精后囊胚质量的影响
• 3.2 获能液中添加GSH 对体外受精的影响
• 3.3 受精液中添加GSH 对体外受精的影响
• 4 讨论
• 4.1 半胱氨酸、胱氨酸和Β-巯基乙醇对体外受精的影响
• 4.2 GSH 与精子获能
• 4.3 GSH 与体外受精
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文