高温调节耐药胃癌细胞化疗敏感性的分子机制

论文摘要

背景:多药耐药是造成肿瘤化疗失败的主要原因,研究多药耐药的机制和逆转方法就成为亟待解决的问题。国内外的研究表明肿瘤多药耐药存在多种机制,如药物外排增加、药物在细胞内的重新分布、凋亡信号转导途径改变、细胞内外环境改变等,并涉及到多个耐药相关分子,包括P-gp、MRP、GST、LRP、TOPO—Ⅱ等。现在比较公认的两种多药耐药逆转剂维拉帕米和环孢菌素A,由于毒副作用大,限制了在临床的应用。肿瘤热疗在近十几年发展迅速,是一种无创或微创技术,在临床上发现与放、化疗有增敏作用,十分有必要进一步探讨其与多药耐药性的关系。 目的:观察43℃高温对人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞多药耐药的影响,高温对加用化疗药物ADM、CDDP、5-FU、TAX时逆转SGC7901/ADM细胞多药耐药的分子机制。 材料和方法:选用人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM和对照的人胃癌敏感细胞SGC7901株。采用MTT试验、RT-PCR法、Western blot法、免疫细胞化学染色、Rho123外排试验、TUNEL法、PI染色流式细胞技术,检测在不同温度和不同药物作用下,人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞和对照的人胃癌敏感SGC7901株细胞的体外药物敏感性,多药耐药相关基因MDR1、P-gp、MRP、LRP在mRNA水平和蛋白水平上的表达,P-gp的外排功能及对肿瘤细胞周期和细胞凋亡的影响。 结果:实验发现人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞除了对诱导耐药的ADM耐受,对CDDP、5-Fu、TAX也有交叉耐药。高温43℃可降低人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞的生存率,部分逆转细胞耐药。在人胃癌敏感株SGC7901细胞中未检出MDR1、PGP、MRP、LRP基因的mRNA,在人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞中检出MDR1、P-gp、MRP的mRNA,未检出LRP的mRNA。高温43℃可降低人胃癌耐药株SGC7901/ADM细胞及在此温度下合并ADM、CDDP、5

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 细胞株
• 1.1.2 培养基
• 1.1.3 缓冲液
• 1.1.4 工具酶
• 1.1.5 抗体
• 1.1.6 试剂及试剂盒
• 1.1.7 引物
• 1.1.8 主要仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 细胞培养
• 1.2.2 MTT
• 1.2.3 RT-PCR
• 1.2.4 免疫细胞化学染色
• 1.2.5 Western Blot
• 123)外排试验'>1.2.6 罗丹明(Rh₁₂₃)外排试验
• 1.2.7 PI staining
• 1.2.8 TUNEL
• 结果
• 2.1 高温可以部分逆转胃癌耐药细胞对于化疗药物的敏感程度
• 2.2 高温对于MDR1、MRP、LRP基因mRNA水平的影响
• 2.3 高温对于P-gp、MRP、LRP蛋白表达水平的影响
• 2.3.1 免疫细胞化学染色检测P-gp、MRP、LRP蛋白表达
• 2.3.2 Western blot检测P-gp蛋白的表达水平
• 2.4 高温可以降低耐药细胞株对Rho123的外排能力
• 2.4.1 耐药细胞株对Rho123的外排能力高于敏感株
• 2.4.2 环孢菌素A可以逆转耐药细胞株对Rho123的外排能力
• 2.4.3 高温对SGC7901／ADM抗药性的逆转作用
• 2.5 高温对细胞周期以及细胞凋亡的影响
• 2.5.1 PI染色方法检测高温对细胞周期及细胞凋亡的影响
• 2.5.2 TUNEL法检测高温对细胞凋亡的影响
• 讨论
• 3.1 体外药物敏感试验
• 3.2 热效应对耐药细胞基因和蛋白表达的影响
• 3.3 高温43℃对人胃癌耐药株SGC7901细胞P-gp功能的影响
• 3.4 热效应对耐药细胞的细胞周期和细胞凋亡的分析
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢