论文摘要
目的:制备5个表达鸡源表皮生长因子受体（cEGFR）部分肽段的基因重组T7噬菌体疫苗,检测其EGFR抗原性,并初步观察其诱导产生的内源性抗EGFR抗体在C57BL/6J纯系小鼠Lewis肺癌模型上的抗肿瘤效果。 方法:用RT-PCR方法从鸡睾丸组织总RNA中克隆出EGFR膜外区基因片段,将其克隆到载体pMD18-T Vector上,并转化E.coli DH5α感受态细胞,从阳性克隆中提取质粒,对该基因片段进行测序。用DNAStar软件对基因对应的蛋白质序列进行分析,选取亲水性高、抗原性强的区段,设计5对引物,将PCR扩增的片段亚克隆到T7噬菌体上。经筛选的5个肽段分别展示于其衣壳次要头蛋白（P10B）上,构建了5个cEGFR基因重组T7噬菌体疫苗。用该重组噬菌体侵染其宿主菌,液体扩增并纯化出重组噬菌体疫苗。经SDS-PAGE电泳及Western Blot抗原性检测,确认cEGFR-T7P10B融合蛋白的表达情况及其EGFR抗原性。用该重组噬菌体疫苗经脚掌、腋下及颌下皮内和颈背部皮下多点组合免疫4w龄的C57BL/6J纯系小鼠,每周1次,连续4w。免疫3w的小鼠血清与高表达EGFR的A431细胞孵育,抗鼠荧光二抗标记,流式细胞仪法检测被标记的细胞,确认特异性鼠抗EGFR抗体的产生。免疫4w后,腿部外侧皮下接种纯系Lewis肺癌细胞株,建立C57BL/6J纯系小鼠Lewis肺癌动物模型,10d后小心分离瘤体,各实验治疗组与空白噬菌体对照组瘤体均重两两比较采用t检验,观察各实验治疗组的抗肿瘤效果。
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标签：表皮生长因子受体论文; 噬菌体论文; 噬菌体展示技术论文; 噬菌体疫苗论文;