孕酮、干扰素τ对牛子宫内膜细胞IgSF、Proteoglycan及ECM配体基因表达的影响

论文摘要

本研究以处于黄体期的奶牛子宫内膜细胞为试验材料,利用组织块法培养奶牛子宫内膜细胞,采用实时荧光定量PCR法研究孕酮（Progesterone, P）和干扰素-τ（Interferon-τ, IFN-τ）对奶牛子宫内膜细胞中免疫球蛋白（IgSF）、蛋白聚糖（Proteoglycan）及ECM配体基因表达的影响。结果如下：利用组织块法成功培养出奶牛子宫内膜细胞,包括腺上皮细胞和间质细胞,细胞传代可正常生长,且以间质细胞为主。孕酮可以促进CD44基因及其配体（collagen、Fibronectin、Laminin）的表达,相对于空白组,CD44、Laminin差异极显著（P<0.01）,collagen、Fibronectin差异不显著（P>0.05）。干扰素T可以促进CD44基因及其配体（collagen、Fibronectin、Laminin）的表达,相对于空白组,collagen差异极显著（P<0.01）,Laminin差异显著（P<0.05）,CD44、Fibronectin差异不显著（P>0.05）。孕酮和干扰素τ共同作用则可促进CD44基因及其配体collagen、Laminin的表达,而抑制Fibronectin的表达,相对于空白组,CD44、collagen、Fibronectin差异不显著（P>0.05）,Laminin差异显著（P<0.05）。孕酮可以抑制ECM受体通路中Syndecan基因及其配体THBS、Tenascin的表达,促进配体collagen、Fibronectin的表达,相对于空白组,差异均不显著（P>0.05）。干扰素τ可以抑制ECM受体通路中Syndecan基因及其配体THBS的表达,促进配体Tenascin、collagen、Fibronectin的表达,相对于空白组,Syndecan、THBS、Fibronectin差异不显著（P>0.05）,Tenascin、collagen差异极显著（P<0.01）。孕酮和干扰素T共同作用可以抑制Syndecan基因及其配体Fibronectin、THBS的表达,促进collagen、Tenascin的表达,相对于空白组,Syndecan、Fibronectin、collagen、Tenascin差异不显著（P>0.05）,THBS差异显著（P<0.05）。孕酮可抑制ECM受体通路中CD47基因及其配体THBS的表达,相对于空白组,差异均不显著（P>0.05）。干扰素τ抑制CD47基因的表达,促进THBS的表达,相对于空白组,差异均不显著（P>0.05）。孕酮和干扰素T共同作用可抑制ECM受体通路中CD47基因及其配体THBS的表达,相对于空白组,THBS差异显著（P<0.05）,CD47基因差异不显著（P>0.05）。孕酮、干扰素τ单独作用及其共同作用均促进ECM受体通路中RHAMM基因的表达,相对于空白组,差异均极显著（P<0.01）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 细胞粘附分子（cell adhesion molecule,CAM）
• 1.1.1 Ⅲ型细胞外基质受体（CD44）
• 1.1.2 透明质酸介导的细胞游走受体（RHAMM）
• 1.1.3 整合素相关蛋白（CD47）
• 1.1.4 联合素（syndecan）
• 1.2 细胞外基质成分
• 1.2.1 蛋白聚糖
• 1.2.2 胶原（Collagen）
• 1.2.3 多黏附基质蛋白
• 1.2.4 其他细胞外基质—血小板反应蛋白（THBS）
• 1.3 研究目的及意义
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 组织样本采集
• 2.1.2 主要仪器和设备
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 细胞培养器皿耗材
• 2.1.5 主要试剂和溶液的配制
• 2.1.6 提取RNA的器皿的处理
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 牛子宫内膜细胞培养
• 2.2.2 实时荧光定量PCR
• 2.3 数据分析
• 2.3.1 ECM受体通路中相关基因表达水平的计算
• 2.3.2 统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 细胞培养
• 3.1.1 原代细胞培养
• 3.1.2 传代细胞的培养
• 3.2 细胞总RNA提取
• 3.3 常规PCR反应
• 3.4 荧光定量PCR扩增的标准曲线
• 3.5 扩增产物的特异性
• 3.6 不同处理对ECM受体通路中相关基因表达的影响
• 3.6.1 不同处理对collagen基因表达的影响
• 3.6.2 不同处理对Tenascin基因表达的影响
• 3.6.3 不同处理对syndecan基因表达的影响
• 3.6.4 不同处理对CD44基因表达的影响
• 3.6.5 不同处理对CD47基因表达的影响
• 3.6.6 不同处理对Fibronectin基因表达的影响
• 3.6.7 不同处理对THBS基因表达的影响
• 3.6.8 不同处理对RHAMM基因表达的影响
• 3.6.9 不同处理对Laminin基因表达的影响
• 4 讨论
• 4.1 RNA的抽提
• 4.2 内参基因选择
• 4.3 实时荧光定量的各种方法比较
• 4.4 激素处理子宫内膜细胞对ECM受体通路中各基因的表达影响
• 4.4.1 激素处理子宫内膜细胞对CD44及其配体collagen、Fibronectin、Laminin表达影响
• 4.4.2 激素对ECM受体通路中Syndecan及其配体collagen、Fibronectin、THBS、Tenascin表达的影响
• 4.4.3 激素对ECM受体通路中CD47及其配体THBS表达的影响
• 4.4.4 激素对ECM受体通路中RHAMM表达的影响
• 4.5 实验数据的分析
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢