桑黄菌质多糖的分离纯化及降血糖作用的研究

论文摘要

桑黄（Phellinus linteus）是一种珍贵的药用真菌,含有多种有效成分,富含具有生物反应调节作用的活性多糖。真菌活性多糖的研究备受关注,但国内外运用桑黄多糖降血糖作用的研究甚少,为研究开发具有应用价值的降血糖功能性食品和药物。本论文针对桑黄固体和液体发酵培养条件优化、桑黄菌丝多糖的提取、分离纯化及结构初步鉴定、以及桑黄多糖与中药复方的体内降血糖作用活性方面进行了研究。结论如下：1桑黄液体发酵培养基的最佳碳源是玉米粉和黄豆粉,最佳氮源是酵母浸出汁和黄豆粉,最佳碳氮比为25：1。正交实验结果表明,桑黄液体发酵培养菌丝的最佳工艺为：温度28℃,装液量80 mL,转速110r/min,发酵培养时间为9 d。液体发酵培养一、二级菌种,再转接到PDA液体培养基中培养5 d,可得到均匀透明,密度适中的菌丝球。2选择经济效益好的巨菌草做固体培养基。固体发酵培养转接液体菌种,菌丝生长更快,能很好缩短培养周期。3通过单因素和正交实验优化桑黄菌丝多糖的提取工艺,结果表明：在提取温度90℃,料液比1：40,提取时间为1.5 h,以3倍体积的乙醇醇沉多糖的条件下多糖得率最高,达到12.056%。4桑黄多糖经去蛋白、脱色素、去小分子物质后,用DEAE SephadexA-50进一步分离纯化得到三个多糖组分,依次命名为PIP-Ⅰ、PIP-Ⅱ和PIP-Ⅲ,PIP-Ⅰ经SephadexG-200纯化后为纯多糖,验明是均一多糖。紫外光谱扫描结果表明PIP-Ⅰ不含核酸和蛋白组分。用核磁共振氢谱和红外光谱扫描研究PIP-Ⅰ的结构特征。5结合中药配伍理论,采用四氧嘧啶造小鼠高血糖模型,探讨桑黄菌丝多糖及其与中药复方复合物的降血糖作用,结果表明：桑黄复方多糖组和桑黄多糖低剂量组的降血糖效果最佳,中药复方在一定程度上有辅助降血糖的功效

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略语一览表
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 多糖的研究近况
• 1.3 真菌多糖的概况
• 1.4 真菌多糖的分离纯化
• 1.4.1 真菌多糖的提取方法
• 1.4.2 真菌多糖的分离方法
• 1.4.3 真菌多糖的纯化
• 1.5 桑黄的研究现状
• 1.5.1 桑黄简介
• 1.5.2 桑黄的主要化学成分
• 1.5.3 桑黄多糖的药理作用
• 1.6 多糖结构的波谱学方法鉴定
• 1.6.2 红外光谱法
• 1.6.3 核磁共振法
• 1.6.4 质谱法
• 1.7 本研究的目的、意义和内容
• 1.7.1 本研究的目的和意义
• 1.7.2 本研究的内容
• 第二章 桑黄发酵条件优化
• 2.1 引言
• 2.2 材料与仪器
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 主要仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 发酵培养基
• 2.3.2 试验参数测定
• 2.3.3 液体发酵条件分析
• 2.3.4 液体发酵培养正交试验
• 2.3.5 桑黄固体发酵扩大培养
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 碳源对菌丝生长的影响
• 2.4.2 氮源对菌丝生长的影响
• 2.4.3 碳氮比对菌丝生长的影响
• 2.4.4 培养温度对菌丝在液体发酵过程中的影响
• 2.4.5 转速对菌丝在液体发酵过程中的影响
• 2.4.6 装液量对菌丝在液体发酵过程中的影响
• 2.4.7 培养天数对菌丝在液体发酵过程中的影响
• 2.4.8 液体发酵培养正交试验结果
• 2.5 小结
• 第三章 桑黄菌丝多糖提取条件的优化
• 3.1 引言
• 3.2 材料与仪器
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 主要仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 菌丝多糖的提取流程
• 3.3.2 葡萄糖标准曲线的制定
• 3.3.3 桑黄菌丝体多糖粗多糖提取单因素试验
• 3.3.5 桑黄菌丝体多糖得率的计算公式
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 葡萄糖标准曲线
• 3.4.2 桑黄粗多糖热水提取单因素试验结果
• 3.4.3 桑黄粗多糖提取的正交实验结果
• 3.5 小结
• 第四章 桑黄菌丝多糖的纯化及基本结构
• 4.1 引言
• 4.2 材料与仪器
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 主要试剂
• 4.2.3 主要仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 菌丝多糖的分离纯化路线
• 4.3.2 菌丝多糖的去蛋白
• 4.3.3 菌丝多糖的去色素
• 4.3.4 菌丝多糖透析去小分子物质
• 4.3.5 柱层析分级洗脱纯化
• 4.3.6 菌丝多糖的冷冻干燥
• 4.3.7 菌丝多糖的纯度鉴定
• 4.3.8 菌丝多糖的结构分析
• 4.4 结果与分析
• 4.4.1 柱层析纯化结果
• 4.4.2 冷冻干燥结果
• 4.4.3 结构分析结果
• 4.5 小结
• 第五章 桑黄多糖的降血糖作用
• 5.1 引言
• 5.2 材料与仪器
• 5.2.1 实验动物
• 5.2.2 主要试剂
• 5.2.3 主要仪器
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 活性多糖降血糖作用研究方法
• 5.3.2 四氧嘧啶试剂液的配制
• 5.3.3 四氧嘧啶造高血糖模型
• 5.3.4 空腹血糖指标的测定
• 5.3.5 试验小鼠分组与给药
• 5.3.6 试验小鼠体重指标的测定
• 5.3.7 糖耐量指标的测定
• 5.3.8 统计方法
• 5.4 结果与分析
• 5.4.1 各试验组血糖的变化情况
• 5.4.2 各试验组的血糖下降百分率
• 5.4.3 各试验组小鼠体重的变化情况
• 5.4.4 糖耐量指标
• 5.5 小结
• 第六章 总结和展望
• 参考文献
• 致谢