IGF-1对水牛入植前胚胎发育及凋亡的影响

论文摘要

本研究主要探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对水牛体外受精（IVF）及体细胞核移植（SCNT）胚胎发育和凋亡的影响及其作用机制,为进一步完善水牛胚胎体外培养体系及提高胚胎质量提供一定的科学依据。本研究分为以下五个试验。试验1通过实时荧光定量PCR的方法研究IGF-1受体（IGF-1R）在植入前水牛IVF及SCNT胚胎中的表达情况。结果显示,IGF-1R在水牛IVF及SCNT各时期胚胎中均有表达,但在胚胎分裂的早期（ⅠVF:2-cell; SCNT:2-8cell）表达量较高,与卵母细胞的表达量无显著差异（P>0.05）,而后逐渐下降,到囊胚期达到最低。试验2主要探讨培养液中添加IGF-1对水牛胚胎发育的影响。结果发现,添加不同浓度的IGF-1（0、5、10、50、100ng/mL）对水牛IVF胚胎的分裂率没有显著影响（P>0.05）,但添加50ng/mL IGF-1组胚胎的囊胚发育率显著高于不添加IGF-1的对照组（35.12%vs22.97%,P<0.05）；用添加50ng/mL IGF-1的培养液培养水牛体细胞核移植胚胎,与不添加IGF-1的对照组相比胚胎分裂率差异不显著（P>0.05）,但囊胚率得到显著提高（46.43%vs34.18%,P<0.05）。试验3研究IGF-1对水牛IVF及SCNT胚胎IGF-1R mRNA表达的影响时发现,添加50ng/mL IGF-1培养的水牛IVF及SCNT囊胚IGF-1R mRNA的表达量与不添加IGF-1的对照组相比显著升高（P<0.05）。试验4用TUNEL方法检测水牛IVF及SCNT囊胚细胞凋亡情况的结果显示,添加50ng/mL IGF-1培养液培养的水牛IVF及SCNT胚胎其囊胚细胞数均显著高于不添加IGF-1的对照组（P<0.05）,而且两组的囊胚细胞凋亡率都显著低于对照组（P<0.05）。试验5,实时荧光定量PCR的检测结果显示,经添加50ng/mL IGF-1培养液培养的水牛IVF及SCNT囊胚,促凋亡基因baxmRNA的表达量显著低于对照组（P<0.05）,而抑凋亡基因bcl-2mRNA的表达量显著高于对照组（P<0.05）。以上研究结果表明：（1）IGF-1R在水牛卵母细胞、植入前体外受精及体细胞核移植各细胞期胚胎中都有表达；（2）水牛胚胎培养液中添加50ng/mL的IGF-1能够促进胚胎的发育,增加囊胚细胞数,并降低囊胚细胞凋亡率；（3）IGF-1通过促进IGF-1R的表达,下调促凋亡基因bax,上调抑凋亡基因bcl-2的表达来促进胚胎的发育和降低胚胎的凋亡率。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 文献综述
• 1 细胞凋亡的研究进展
• 1.1 细胞凋亡相关的基因
• 1.2 细胞凋亡的信号通路
• 1.3 细胞凋亡的检测方法
• 2 植入前胚胎细胞的凋亡
• 2.1 卵裂期和致密期胚胎的凋亡
• 2.2 囊胚期细胞的凋亡
• 3 引起胚胎细胞凋亡的原因
• 3.1 染色体的异常
• 3.2 卵泡及卵母细胞的因素
• 3.3 体外操作程序
• 3.4 体外培养环境
• 4 IGF-1对胚胎发育及凋亡的作用与调节机制
• 4.1 IGF-1对胚胎发育及凋亡的作用
• 4.2 IGF-1对细胞凋亡的调控
• 5 研究目的与意义
• 第二部分 试验部分
• 前言
• 1 试验材料与方法
• 1.1 主要试验试剂
• 1.2 主要仪器
• 1.3 卵母细胞的体外成熟
• 1.4 体外受精
• 1.5 体细胞核移植重构胚的构建
• 1.6 单层颗粒细胞的制备
• 1.7 胚胎的体外培养
• 1.8 TUNEL凋亡检测
• 1.9 实时荧光定量PCR
• 1.10 试验设计
• 1.11 统计分析
• 2 实验结果
• 2.1 IGF-1R mRNA在水牛IVF及SCNT胚胎中的表达
• 2.2 不同浓度的IGF-1对水牛IVF胚胎发育的影响
• 2.3 IGF-1对水牛SCNT胚胎发育的影响
• 2.4 IGF-1对水牛IVF及SCNT囊胚IGF-1R mRNA表达的影响
• 2.5 IGF-1对水牛IVF及SCNT囊胚细胞凋亡的影响
• 2.6 IGF-1对水牛IVF及SCNT囊胚凋亡相关基因bax、bcl-2 mRNA表达的影响
• 3 分析与讨论
• 3.1 IGF-1对水牛胚胎发育的影响
• 3.2 IGF-1对水牛胚胎细胞凋亡的影响
• 4 结论
• 参考文献
• 图片与说明
• 附录
• 致谢
• 论文发表情况