Ngn2和Math6在小鼠内耳不同时期表达的初步研究

论文摘要

目的研究ngn2（neurogenin2）和math6在不同时期小鼠内耳的表达变化，并初步探讨其对螺旋神经元发育的作用。方法1.本实验选取不同时期BALB/c小鼠，以E13.5、E14.5、P1、成年为观察时间点，将小鼠耳蜗固定后切片，行HE染色，识别不同时期的耳蜗结构，以便后期的进一步研究。2.将上述不同时期的耳蜗切片进行免疫组织化学染色，了解ngn2和math6蛋白在耳蜗中的表达情况。3.以E12.5、E13.5、E14.5、E17.5、P1、P7和成年为观察时间点，应用realtime qPCR技术检测ngn2、math6在耳蜗中mRNA的表达变化。结果1. E13.5蜗管完成大约3/4转，平衡听觉神经节已分化为前庭神经节（VG）和螺旋神经节（SG），发育的螺旋神经节尚无神经纤维长出；E14.5耳蜗发育中的螺旋神经节开始伸出神经纤维，柱状上皮少许部分开始分化；P1耳蜗已达到成熟长度，约1.75转，发育的螺旋神经节和毛细胞形成纤维连接，底转盖膜开始形成；成年的耳蜗各形态结构清晰，内外毛细胞、盖膜等可清楚辨认。2．免疫组织化学结果提示，在E13.5、E14.5和P1，ngn2和math6在螺旋神经节处有不同程度的阳性表达；在成年期，math6有弱表达，但ngn2几乎不表达，各组间差异有统计学意义（P<0.05）。3. Real time qPCR结果提示ngn2在E12.5d呈高表达，随后在E13.5d表达量下调，直至成年呈低水平表达；math6在E12.5-P1都呈较高水平表达，其中在P1达到高峰，随后于P7至成年表达量下调。结论1.Ngn2在E12.5d表达呈高峰，提示其在有增殖能力的神经祖细胞中起作用；Math6在E12.5d-P1呈高表达，提示其在神经祖细胞的增殖以及分化中起重要作用；2. Ngn2和math6在耳蜗中表达的空间和时间模式的重叠和差异，提示它们在调控通路中可能受到共同的分子调控。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 文献回顾
• 一.小鼠内耳的发育
• 二.Ngn2 和 Math6 的表达以及功能
• 实验一
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验试剂
• 1.3 实验仪器
• 2 方法
• 2.1 准确收获目标胎鼠和仔鼠
• 2.2 对各时期标本行冰冻切片
• 2.3 冰冻切片 HE 染色
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验试剂
• 1.3 实验仪器
• 1.4 引物序列
• 2 方法
• 2.1 免疫组织化学染色
• 2.2 积分光密度（IOD）和平均光密度分析
• 2.3 荧光定量 PCR（real time qPCR）检测各组不同时期小鼠耳蜗 ngn2、math6 和 Ptf1a mRNA 的表达
• 2.4 统计分析
• 3 结果
• 3.1 免疫组织化学染色
• 3.2 平均光密度值分析
• 3.3 Ngn2、math6 和 Ptf1a 在内耳不同时期的表达变化模式
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢