过氧化物酶体增殖物激活受体γ在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中作用的研究

论文摘要

目的:非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis, NASH）是由于肝内脂质沉积而引起的肝细胞坏死、炎症和纤维化等肝损伤,是非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）由单纯性肝脂肪变向肝硬化甚至肝癌进展的重要阶段,NASH导致的肝硬化具有与乙、丙型肝炎肝硬化相同的不良预后。国内外学者对其日益关注,研究不断深入,但其病因及发病机制仍不十分清楚,在防治上亦缺乏有效手段。目前认为胰岛素抵抗（insulin resistence,IR）是NASH发病的重要因素之一,改善胰岛素抵抗可能有助于防止本病的进展。罗格列酮作为过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptor gamma,PPARγ）的高亲和力激动剂,能明显增强组织对胰岛素的敏感性。PPARγ属于甾体激素类受体超家族中的细胞核受体家族成员,人体内PPARγ在肝脏、肌肉均有表达,PPARγ在NASH发病中的作用及其机制目前尚未明确。本研究采用高脂、胆碱-蛋氨酸缺乏（high fat,methionine and choline deficient diet,MCD）饮食建立小鼠NASH模型,应用PPARγ激动剂罗格列酮干预治疗,以逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）方法和Western blot法研究PPARγ、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）在NASH小鼠肝组织中的表达情况及其与病情进展的关系,以探讨PPARγ被罗格列酮激活后,PPARγ在NASH发病中的作用及其机制,是否可抑制TNF-α的表达,延缓或阻止NASH的进展,以进一步揭示改善胰岛素抵抗在NASH中的作用,为有效防治本病提供新的思路。方法:选用健康雄性C57BL6/J小鼠15只,随机分为3组,每组5只。模型组采用MCD饲料,对照组给予胆碱、蛋氨酸充足的饲料,罗格列酮干预组以MCD饲料加罗格列酮（50mg/kg/d）,喂养3周。血清甘油三酯（triglyceride,TG）,丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）采用日本Olympus AU 2700全自动生化分析仪测定;肝组织病理学变化采用苏木精-伊红（hematoxylin-eosin,H&E）染色观察;肝组织PPARγmRNA及TNF-αmRNA和蛋白表达分别采用RT-PCR和Western blot检测。结果:1动物一般情况:对照组小鼠活泼、毛发有光泽,体重逐渐增加。模型组和罗格列酮干预组小鼠体重均下降,尤以模型组明显。对照组小鼠体重、肝湿重均较模型组和干预组增加显著（分别为25.20±1.10、16.80±2.28、17.60±0.89,0.12±0.01、0.07±0.01、0.07±0.01,P<0.05）,模型组体重、肝重与罗格列酮干预组相比差异无显著性意义。肝脏指数:对照组显著高于罗格列酮干预组（0.47±0.04,0.37±0.07,P<0.05）,模型组与对照组、干预组差别无显著性意义。2血清生化学改变:实验动物ALT水平模型组>罗格列酮干预组>对照组,依次为:211.00±12.73、99.75±10.97、48.33±11.59,P<0.01;血清TG水平模型组>对照组>罗格列酮干预组,依次为:0.73±0.04、0.53±0.14、0.30±0.07,P<0.01。3肝脏病理学变化:肉眼观察:对照组小鼠肝脏为红褐色,明亮有光泽。模型组小鼠肝脏体积明显减小,整个肝脏呈浅黄色,与周围组织有粘连,切面油腻、无光泽。罗格列酮干预组小鼠肝脏体积亦有缩小,为红褐色、有光泽。光镜下观察:对照肝组织切片肝小叶结构基本正常;模型组肝细胞浊肿,形成以大泡性为主的肝细胞脂肪变,以腺泡3带最为明显,肝窦变窄,小叶内可见点状或灶状肝细胞坏死伴有炎症细胞浸润,以单核细胞、淋巴细胞为主,并有少量中性粒细胞（F23、G12、S1）。罗格列酮干预组小鼠肝损伤较模型组明显减轻,肝细胞轻度肿胀,脂肪变轻微（F01、G0、S0）,未见明显肝细胞坏死及炎症细胞浸润。4肝组织PPARγmRNA的表达:实验动物肝组织PPARγmRNA表达水平依次为:罗格列酮干预组>模型组>对照组（0.83±0.01、0.75±0.01、0.72±0.01,P<0.01）,差异具有显著性意义。5肝组织PPARγ蛋白表达情况:实验动物肝组织PPARγ蛋白水平表达与mRNA表达一致,依次为:罗格列酮干预组>模型组>对照组（0.77±0.00、0.69±0.02、0.49±0.01,P<0.01）,差异具有显著性意义。6肝组织TNF-αmRNA表达情况:实验动物肝组织TNF-αmRNA表达水平依次为:模型组>罗格列酮干预组>对照组（1.11±0.01、0.99±0.02、0.91±0.00,P<0.01）,差异具有显著性意义。7小鼠肝组织TNF-α蛋白表达情况:实验动物肝组织TNF-α蛋白表达水平依次为:模型组>罗格列酮干预组>对照组（0.99±0.01、0.60±0.01、0.47±0.01,P<0.01）,差异具有显著性意义。结论:1高脂、胆碱-蛋氨酸缺乏饮食3周可诱导具有典型NASH临床特征的肝损伤动物模型,此模型符合人类NASH发病的病理学特点。2 PPARγ和TNF-α在NASH模型中的表达存在一致变化,推测PPARγmRNA及蛋白表达增多为机体的一种代偿性反应机制,TNF-α介导的炎症反应促进NASH的进展。3 PPARγ被罗格列酮激活后,抑制肝组织TNF-αmRNA及蛋白的表达,减轻肝细胞脂肪变和肝组织炎症,阻止NASH的进展,提示其在治疗NASH中存在很大的前景。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 过氧化物酶体增殖物激活受体γ在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中作用的研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 过氧化物酶体增殖物激活受体γ、肿瘤坏死因子α与非酒精性脂肪性肝炎中胰岛素抵抗的关系
• 致谢
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