论文题目: HSP70介导肾脏缺血预适应保护作用的实验研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 金欢胜
导师: 吴雄飞,金锡御
关键词: 缺血再灌注,缺血预适应,热休克蛋白,基因转染,腺相关病毒
文献来源: 第三军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 缺血再灌注损伤导致的急性肾功能衰竭(Acute renal failure,ARF)发生率很高,最近有关缺血预适应(Ischemia Preconditioning,IP)预防缺血再灌注损伤的研究日益增多。器官短暂缺血/再灌注后能耐受更长时间缺血的现象称为IP。IP现象最先发现于心脏,以后发现肾脏也存在缺血预适应现象。缺血预适应的机制尚未完全清楚。文献报道,肾脏在缺血预适应后,热休克蛋白70(Heat shock proteins,HSP70)的表达升高,HSP70的高表达是否参与IP保护肾脏缺血再灌注损伤的机理,国内外未见报道。本课题拟运用腺相关病毒为真核表达载体制备含HSP70基因的重组腺相关病毒载体,进行体内外转染实验,证明HSP70在肾脏缺血预适应中是否介导保护作用。目的:通过体内外转染实验研究AAV-HSP70基因转染介导肾小管上皮细胞抗氧化损伤的保护作用及在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中介导的保护作用,探讨HSP70在肾脏缺血预适应中介导的保护作用机理。缺血预适应机制的深入研究对肾脏缺血再灌注损伤的防护及延长移植肾的存活时间有重要意义。方法: 第一部分:AAV-HSP70的构建及表达1. RT-PCR法从人肝癌细胞系HepG2中克隆HSP70基因,获得序列完全正确的全长HSP70cDNA。2. 用已克隆的正确序列HSP70 基因片断, 构建腺相关病毒重组体pAAV-IRES-hrGFP/HSP70,将此质粒扩增、提纯后与pAAV-Helper、pAAV-RC 共转染AAV-293细胞,通过同源重组获得AAV-HSP70重组体,扩增后获得高滴度的AAV-HSP70病毒液。第二部分:AAV-HSP70转染对肾小管上皮细胞抗氧化氧损伤的保护作用将AAV-HSP70体外转染体外培养的肾小管上皮细胞,通过免疫组化法检测目的基因在转染细胞中的表达,通过MTT法及51Cr释放试验检测在不同浓度的H2O2作用下HSP70的保护作用。第三部分:AAV-HSP70转染对大鼠缺血再灌注损伤保护作用的实验研究1. 建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型及缺血预适应模型,检测HSP70的表达;
论文目录:
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中文摘要
论文正文 HSP70 介导肾脏缺血预适应保护作用的实验研究
前言
第一部分 AAV—HSP70 的构建及表达
第一节 HSP70 基因的克隆和含 HSP70/pAAV-IRES-hrGFP 的构建
材料与方法
结果
讨论
第二节 HSP70 腺相关病毒的制备、表达及纯化
材料与方法
结果
讨论
第二部分 体外实验:AAV—HSP70 转染对肾小管上皮细胞氧化氧损伤的保护作用
材料与方法
结果
讨论
第三部分 AAV-HSP70 转染对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用
材料与方法
结果
讨论
全文结论
参考文献
致谢
照片
文献综述一 热休克蛋白70 的生物学作用
参考文献
文献综述二 肾脏缺血预适应的研究进展
参考文献
攻读博士学位期间发表的论文
发布时间: 2005-11-08
参考文献
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