牛初乳中胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）的分离与纯化

论文摘要

胰岛素样生长因子（Insulin-like Growth Factors,IGFs）在结构上与胰岛素前体有高度的同源性,具有胰岛素的一些功能和特性,根据分子结构将IGFs划分为IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ两类。到目前为止,研究较多的是IGF-Ⅰ,分子量为7649道尔顿,等电点是8.4。牛初乳是指奶牛分娩后7天内特别是3天内所分泌的乳汁。初乳中不仅含有丰富的营养物质,而且还含有大量的生物活性物质。近些年的研究表明,IGF-Ⅰ除了在组织细胞存在外,还在牛初乳中大量存在,是牛初乳中最重要的促生长因子。本文对牛初乳中IGF-Ⅰ的提取和纯化进行了研究,对分离获取高水平IGF-Ⅰ的前处理条件进行了较为细致的条件优化,包括脱脂乳及乳清的制备,去除IGF-Ⅰ结合蛋白及减压浓缩条件的探索。将所得的IGF-Ⅰ粗提品,进行超滤,并对不同pH值、不同温度条件进行详细优化,再将所得样品采用SephadexG50葡聚糖凝胶柱层析作为分离纯化的手段,并对其分离条件进行了改进。对每一步骤中的粗提物分别用SDS-PAGE电泳检测,以验证提纯效果。每一步骤中IGF-Ⅰ的质量浓度检测均采用放射免疫法测定。本试验获得了一整套从牛初乳中分离纯化IGF-Ⅰ的方法,最终得到分离物中IGF-Ⅰ质量浓度为1915.56ng/ml,约为初乳的114倍,得率为27.23%。本方法为后续工作中采用规模化、高水平生产IGF-Ⅰ提供了实验依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1.1 课题研究背景
• 1.1.1 牛初乳及IGFs的概念
• 1.1.2 IGFs的生物学功能
• 1.1.3 IGFs的病理学应用
• 1.1.4 IGFs的影响因素
• 1.2 课题研究现状
• 1.2.1 在免疫调节方面的研究
• 1.2.2 在改善糖尿病物质代谢方面的研究
• 1.2.3 在对糖尿病慢性并发症方面的影响
• 1.2.4 IGFs分离纯化的研究现状
• 1.3 课题研究的依据及意义
• 1.4 课题研究的内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验试剂
• 2.3 主要仪器和设备
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 前处理条件的优化
• 2.4.2 超滤法
• 2.4.3 超滤法的条件优化
• 2.4.4 柱层析
• 2.4.5 柱层析的条件优化
• 2.4.6 SDS-PAGE电泳
• 2.4.7 IGF-Ⅰ的质量浓度及活性的测定
• 第三章 结果与分析
• 3.1 前处理条件的优化结果与分析
• 3.1.1 制备脱脂乳试验的结果与分析
• 3.1.2 脱脂乳制备乳清试验的结果与分析
• 3.1.3 去除IGF-Ⅰ结合蛋白试验的结果与分析
• 3.1.4 减压浓缩条件试验的结果与分析
• 3.2 超滤法的条件优化结果与分析
• 3.3 柱层析的条件优化结果与分析
• 3.3.1 上样量体积条件的优化
• 3.3.2 上样量浓度条件的优化
• 3.4 SDS-PAGE电泳
• 第四章 结论
• 4.1 研究结果
• 4.1.1 确立了分离纯化IGF-Ⅰ的技术路线
• 4.1.2 确立了前处理试验的最适条件
• 4.1.3 确立了超滤过程中的最适条件
• 4.1.4 SephadexG50凝胶柱层析条件的改进
• 4.1.5 SDS-PAGE电泳的纯度鉴定
• 4.2 研究取得的创新点
• 4.3 尚存在的不足以及需要进一步解决的问题
• 4.4 研究展望
• 参考文献
• 致谢
• 论文、参加科研情况说明