仔猪冷应激反应中激素、HSP70及其mRNA的动态分析

论文摘要

动物冷应激是制约北方畜牧养殖业发展的主要因素之一,研究冷应激发生机制,探讨应用分子标志物作为评价动物冷应激的指标,对冷应激的预警、防治有重要意义。本研究选择“军牧1号”仔猪,应用放射免疫、免疫印迹、实时荧光定量PCR等技术,从-10℃-4℃、-3℃3℃、4℃10℃三个冷应激强度和冷暴露后不同时间,动态考察了冷应激时血液生理生化、应激激素和四种组织细胞中HSP70及其mRNA的变化规律,提出了将淋巴细胞HSP70及其mRNA作为评价动物冷应激的生物标志物,同时,对“军牧1号”猪HSP70的基因进行了克隆和测序,获得了编码HSP70的核苷酸序列,并对其同源性进行了比较分析。

论文目录

• 前言
• 第一部分 文献综述
• 综述一 动物应激医学及应激的分子调控机制
• 1 应激与动物应激医学
• 2 应激的分子调控机制
• 3 结语
• 综述二 冷应激对动物的影响机制研究进展
• 1 冷应激概念及其生理反应机制
• 2 冷应激对动物机体的影响
• 3 冷应激的评价指标
• 4 冷应激的防制
• 综述三 热休克蛋白70 的分子生物学研究进展
• 1 HSP70 家族的分类
• 2 HSP70 的分子结构及生物学特性
• 3 HSP70 的基因调控
• 4 HSP70 的生物学功能
• 5 HSP 及其编码基因的进化
• 6 HSP70 及其mRNA 的检测方法
• 7 HSP70 的应用和展望
• 第二部分 研究内容
• 实验一 冷应激仔猪血液生理生化指标的变化
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 仔猪不同强度冷应激时血常规的变化
• 2.2 仔猪不同强度冷应激时血液生化指标的变化
• 2.3 “军牧1 号”断乳仔猪血液生理生化指标参考值
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验二 仔猪冷应激时六种激素的动态变化
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 六种激素的标准曲线
• -4℃冷应激时六种激素的动态变化'>2.2 仔猪在-10℃^-4℃冷应激时六种激素的动态变化
• 3℃冷应激时六种激素的动态变化'>2.3 仔猪在-3℃³℃冷应激时六种激素的动态变化
• 10℃冷应激时六种激素的动态变化'>2.4 仔猪在4℃¹0℃冷应激时六种激素的动态变化
• 2.5 不同强度冷应激血清六种激素含量变化的比较分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验三 不同强度冷应激对仔猪四种组织细胞 HSP70 表达的动态研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• -4℃冷应激时 HSP70 的检测结果'>2.1 在-10℃^-4℃冷应激时 HSP70 的检测结果
• 3℃冷应激时 HSP70 的检测结果'>2.2 在-3℃³℃冷应激时 HSP70 的检测结果
• 10℃冷应激时 HSP70 的检测结果'>2.3 在4℃¹0℃冷应激时 HSP70 的检测结果
• 2.4 不同强度冷应激四种组织细胞 HSP70 表达变化的比较分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验四 不同强度冷应激仔猪四种组织细胞HSP70 mRNA 的定量研究
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 总 RNA 提取
• 2.2 常规 PCR 扩增结果
• 2.3 实时荧光定量 PCR 扩增结果
• 2.4 HSP70 mRNA 转录量检测结果
• 3 讨论
• 4 小结
• 实验五 “军牧1号”仔猪 HSP70 基因的克隆、序列测定及与其他动物的同源性分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 2.1 总RNA 鉴定
• 2.2 “军牧1号”猪HSP70 基因的PCR 扩增
• 2.3 重组质粒的 PCR 鉴定和酶切鉴定
• 2.4 HSP70 基因序列测定
• 2.5 序列的同源性分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻博期间发表的学术论文及其他成果
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介
• 附录
• 1 试剂配制
• 2 测序图谱