依泽替米贝通过减少SR-BI表达抑制RAW264.7细胞摄取oxLDL

论文摘要

目的:研究肠道胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝抑制巨噬细胞摄取脂质的作用及可能机制。方法:采用油红O染色、DiI-oxLDL荧光示踪法检测细胞内脂滴数量和细胞摄取脂质含量。采用Western blotting对尼曼-匹克C1型类似蛋白1 （Niemann-Pick type C1 Like-1, NPC1L1）和清道夫受体B族I型（Scavenger receptor class B type I, SR-BI）进行定性和半定量检测;采用Reverse-transcription PCR法检测SR-BI及SREBP-1的mRNA表达。结果: RAW264.7细胞中存在NPC1L1蛋白表达。不同浓度（3, 10和30μM）依泽替米贝（ezetimibe）预先孵育RAW264.7细胞24小时或最佳浓度（30μM）预先孵育不同时间（0, 6, 12和24h）后,换50mg/L oxLDL或DiI-oxLDL继续孵育24小时,结果显示ezetimibe预先孵育组呈浓度依赖性减少脂质蓄积,其中30μM ezetimibe预先孵育24小时组作用最明显,CE百分比相比oxLDL孵育组约减少了47%+0.1%;ezetimibe呈时间依赖性抑制细胞摄取脂质:30μM ezetimibe预先孵育24小时组摄取DiI-oxLDL量较DiI-oxLDL单独孵育组减少约59%+4.5%。ezetimibe预先孵育组能够呈浓度依赖性和时间依赖性减少RAW264.7荷脂细胞中SR-BI蛋白和mRNA表达,较未孵育组分别减少12%+1.5%和80%+6.3%,较oxLDL孵育组分别增加约10%+4.8%和42%+5.3%;同时,ezetimibe预先孵育组能够浓度依赖性和时间依赖性减少RAW264.7荷脂细胞中SREBP-1 mRNA表达,较未孵育组分别减少约18%+0.8%,较oxLDL孵育组分别减少约22%+2.7%。Ezetimibe单独孵育细胞24小时,30μM ezetimibe组相比未孵育组的NPC1L1和SR-BI蛋白表达分别减少约23%+6.2%和15%+2.8%。SR-BI抑制剂非诺贝特预先孵育细胞24小时后换30μM ezetimibe继续孵育24小时,虽然两者联用也能减少SR-BI表达,但无叠加性作用（additive effects）,与非诺贝特单独孵育组比较无明显差异（P>0.05）,但两种药物联用孵育组的DiI-oxLDL摄取量较ezetimibe单独孵育组和fenofibrate单独孵育组分别减少约6.6%+0.3%和8.6%+3.8%。SREBP-1抑制剂油酸预先孵育细胞24小时后换30μM ezetimibe继续孵育24小时,发现对SREBP-1的mRNA表达也有减少作用,相比油酸单独孵育组无显著性差异,但仍然多于ezetimibe处理组。结论:1.小鼠源性巨噬细胞RAW264.7中存在NPC1L1蛋白表达;2.依泽替米贝能够减少RAW264.7细胞中脂质蓄积;3.依泽替米贝通过降低SREBP-1表达进而减少SR-BI表达并最终抑制RAW264.7细胞摄取oxLDL。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验材料
• 一 主要试剂和来源
• 二 主要仪器及设备
• 实验方法
• 1.细胞培养
• 2.低密度脂蛋白的氧化修饰
• 3.制备荧光标记氧化低密度脂蛋白
• 4.油红 O 染色
• 5. 高效液相色谱检测细胞内胆固醇、胆固醇酯
• 6.Western blotting
• 7.RNA 抽提及逆转录-聚合酶链式反应
• 8. 统计学处理
• 实验结果
• 一.尼曼-匹克 C1 型类似蛋白 1 在 RAW264.7 细胞中的表达情况
• 二.依泽替米贝对 RAW264.7 细胞脂质蓄积的影响
• 三.依泽替米贝对 RAW264.7 荷脂细胞中清道夫受体 B 族 I 型的影响
• 四.依泽替米贝对 RAW264.7 细胞中尼曼-匹克 C1 型类似蛋白 1 和清道夫受体 B 族 I 型蛋白表达的影响
• 五.探讨依泽替米贝减少清道夫受体 B 族 I 型的机制
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 本实验研究相关成果
• 参与课题
• 致谢