论文题目: 腺样囊性癌高低转移细胞株基因表达差异性及B7-1、XAGE-1b与转移相关性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物遗传工程学
作者: 杨捷琳
导师: 郑兆鑫,朱乃硕
关键词: 涎腺腺样囊性癌,转移,抑制性消减杂交,双向电泳,干扰
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 转移性和侵袭性是恶性肿瘤的重要特征,与基因和蛋白质水平上的一系列改变密切相关。本论文以涎腺腺样囊性癌这一死亡率较高的口腔恶性肿瘤为研究对象,首先从RNA和蛋白质水平寻找该肿瘤转移相关的基因和蛋白,在大量数据获得并经过验证的基础上,进一步采用RNA干扰的方法研究了部分基因与涎腺腺样囊性癌转移的相关性。 我们应用mRNA抑制性消减杂交技术(SSH)和双向电泳(2D)结合肽质量指纹分析技术(MALDI-TOF-MS),对涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系ACC-M和ACC-2的mRNA和蛋白质表达谱的差异性进行了比较研究。实验结果显示,在抑制性消减杂交实验中,分别以ACC-M和ACC-2两个细胞系为测试子,共获得差异片段34个,其中高转移株细胞中高表达的基因序列有6个,低转移细胞系中高表达的序列有28个,包括两个新的表达序列标签(EST)。以蛋白质等电聚焦结合SDS-PAGE的双向电泳技术分离细胞系总蛋白,银染后经PDQuest-DE软件扫描分析。结果表明,高转移细胞系表达谱的平均蛋白质点数为(978±38),低转移细胞系的平均蛋白质点数为(996±27)。对其中10个差异较明显的蛋白质点,进一步进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测定肽质量指纹图谱,查找SWISS PROT数据库,结果显示,多个蛋白如Stratifin、Symplekin、B7和乳腺癌相关抗原NY-BR-20等在两个细胞系中表达有差异。这些基因或蛋白质参与血管生成、蛋白质合成、信号传递、细胞周期调控、分子伴侣以及免疫共刺激等多种生理活动。 获得以上数据的基础上,结合今年来国内ACCs研究进展,我们选取了B7-1和XAGE-1b两个靶基因,构建siRNA表达载体,有效的抑制了细胞株中上述基因的表达,并进一步检测基因表达抑制后肿瘤细胞体外粘附性、体内转移性的改变,取得了较好的实验数据,认为B7-1基因的表达抑制改变了细胞在模拟胞外基质上的粘附性,同时B7基因作为NK细胞的刺激信号,对激活NK细胞活性有一定作用。XAGE-1b基因作为CTAs抗原家族的一员,与肿瘤转移有相关性,具体机制有待进一步研究。 总之,本文利用消减杂交和比较蛋白质组学的方法,对涎腺腺样囊性癌转移的分子机制的探索进行了初浅的尝试,积累了丰富的表达差异基因和蛋白资料,为下一步的深入研究提供了可能。同时在mRNA和蛋白质水平上进行表达谱分析使结果更全面,具有明显的互补性,这些结果为进一步探索腺样囊性癌肿瘤转移分子机理以及肿瘤控制和基因治疗提供了重要的依据。利用RNA干扰方法对B7-1和XAGE—1b基因的功能研究,初步揭示两者与肿瘤转移的相关性和重要性,为XAGE—1b作为肿瘤转移诊断和治疗的可能靶标的研究打下了基础。本文中得到的
论文目录:
摘要
Abstract
缩略词表
前言
第一章 应用抑制性消减杂交技术筛选ACC细胞株表达差异基因
导言
第一节 材料和方法
第二节 实验结果
第三节 结论与讨论
第二章 应用双向电泳技术筛选ACC细胞株表达差异蛋白
导言
第一节 材料和方法
第二节 实验结果
第三节 结论与讨论
第三章 应用RNA干扰技术研究B7—1基因在ACC转移中的相关性
导言
第一节 材料和方法
第二节 实验结果
第三节 结论与讨论
第四章 应用RNA干扰技术研究XAGE—1b基因在ACC转移中的相关性
导言
第一节 材料和方法
第二节 实验结果
第三节 结论与讨论
第五章 等位Taqman荧光定量PCR在肿瘤裸鼠转移模型中的应用
导言
第一节 材料与方法
第二节 实验结果
第三节 结论与讨论
总结与展望
参考文献
第六章 综述
第一节 涎腺腺样囊性癌转移机制及研究进展
参考文献
第二节 RNA干扰技术机制及研究进展
参考文献
第三节 肿瘤CT抗原家族新成员：XAGE基因家族研究进展
参考文献
论文独创性声明
论文使用授权声明
发布时间: 2005-09-19
参考文献
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