香椿叶总黄酮的提取及其降血尿酸的研究

论文摘要

香椿(Toona sinensis)为楝科(Meliaceae)、香椿属(Toona)、多年生木本植物,是我国特有的植物,种植历史悠久,具有很高的营养价值和医疗保健作用,潜在市场巨大,开发前景十分广阔。本文以香椿叶为原料,主要研究了香椿叶中黄酮成分的提取、分离和纯化工艺及其抗痛风活性。利用分光光度法对不同产地和不同季节的香椿叶总黄酮含量进行了测定,经过测定,不同产地的香椿黄酮含量存在一定差别,以郑州样品含量最高。不同季节香椿黄酮含量呈现明显的季节性变化,到10月份含量达到最大值,是采收香椿叶原料的最佳时期。采用响应面分析法,对微波辅助提取香椿叶总黄酮的工艺条件进行了优化。优化得到了微波辅助提取香椿叶总黄酮的最佳工艺条件:提取时间85s,液料比20mL/g,乙醇体积分数50%,微波输出功率700W,提取2次,此时香椿叶总黄酮的实际得率为2.39%。通过香椿叶总黄酮提取的单因素试验、正交试验,确定水煮提取香椿叶总黄酮的最佳提取工艺为料液比15mL/g、提取1h和提取2次。在此基础上,采用聚酰胺树脂对水提液进行了香椿黄酮初步的分离纯化,结果表明吸附色谱后固体物B达到49.24%,较水提物A的纯度提高了54.04%。有机溶剂萃取实验表明香椿叶总黄酮极性较小,乙酸乙酯是其较好的萃取溶剂。通过对固体物B多次乙酸乙酯萃取,得到乙酸乙酯萃取物C,其黄酮纯度达到71.42%,较固体物A提了68.31%,较固体物B提高了31.06%。乙酸乙酯部位物质组成的TLC、HPLC和LC/MS/MS分析结果表明,香椿黄酮类化合物主要由4种黄酮苷类化合物组成,其相对分子质量分别为:578、464、448和432。在295 nm波长下,用分光光度法测定测定了提取物C体外对黄嘌呤氧化酶(XO)活性的影响。香椿黄酮提取物C在体外能够抑制XO的活性,且呈剂量依赖关系,其IC50为56.91μg/mL。以氧嗪酸钾ip小鼠造成高尿酸血症小鼠模型,以不同剂量的TFTL连续ig给药7d,用磷钨酸法测定提取物C对小鼠血清尿酸(SUA)水平的影响。结果表明,在体内,中、高剂量(100、200 mg/kg)的TFTL能够极显著地降低高尿酸血症小鼠的SUA水平(p＜0.001),使其恢复至正常小鼠水平(p＞0.5)。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1.前言
• 1.1 香椿研究概况
• 1.1.1 香椿简介
• 1.1.2 香椿营养成分研究概况
• 1.1.3 香椿植物化学研究概况
• 1.1.4 香椿生物活性及药理作用
• 1.1.5 香椿开发利用前景
• 1.2 黄酮类化合物研究概况
• 1.2.1 黄酮类化合物概况
• 1.2.2 黄酮类化合物的结构
• 1.2.3 黄酮类化合物的理化性质
• 1.2.4 黄酮类化合物的提取
• 1.2.5 黄酮类化合物的精制
• 1.2.6 黄酮类化合物的生物活性及利用
• 1.3 高尿酸血症与痛风研究概况
• 1.3.1 尿酸概况
• 1.3.2 高尿酸血症及痛风概况
• 1.3.3 影响高尿酸血症及痛风的因素
• 1.3.4 高尿酸血症及痛风流行病学调查
• 1.3.5 高尿酸血症及痛风的预防和治疗
• 1.3.6 高尿酸血症动物模型
• 1.4 黄嘌呤氧化酶及其抑制剂的研究概况
• 1.4.1 黄嘌呤氧化酶概述
• 1.4.2 黄嘌呤氧化酶的主要生理功能
• 1.4.3 黄嘌呤氧化酶的临床应用
• 1.4.4 黄嘌呤氧化酶抑制剂概述
• 1.4.5 化学合成型黄嘌呤氧化酶抑制剂
• 1.4.6 天然黄嘌呤氧化酶抑制剂
• 1.4.7 黄嘌呤氧化酶抑制剂的研究趋势
• 1.5 本论文研究的目的与研究内容
• 1.5.1 本论文的研究目的
• 1.5.2 本论文的研究内容
• 2.材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 香椿叶粉
• 2.1.2 动物
• 2.1.3 药品与试剂
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 香椿叶总黄酮含量的测定
• 2.2.2 微波辅助提取香椿叶总黄酮
• 2.2.3 水煮溶剂萃取法提取香椿叶总黄酮工艺试验
• 2.2.4 香椿叶总黄酮产品的鉴定与分析
• 2.2.5 香椿叶总黄酮体外抑制黄嘌呤氧化酶活性试验
• 2.2.6 对高尿酸血症小鼠SUA水平的影响
• 3.结果与讨论
• 3.1 香椿叶总黄酮含量的测定
• 3.1.1 总黄酮含量标准曲线的绘制
• 3.1.2 不同产地香椿叶中总黄酮含量的测定
• 3.1.3 不同季节香椿叶中总黄酮含量的测定
• 3.2 微波辅助提取香椿叶总黄酮
• 3.2.1 单因素试验结果
• 3.2.2 响应面法对香椿叶总黄酮提取工艺的优化
• 3.2.3 工艺条件的优化及验证实验
• 3.3 水煮溶剂萃取法提取香椿叶总黄酮工艺试验
• 3.3.1 单因素试验
• 3.3.2 正交试验
• 3.3.3 水煮提取香椿叶总黄酮
• 3.3.4 聚酰胺吸附色谱法分离香椿叶总黄酮
• 3.3.5 有机溶剂萃取法纯化香椿叶总黄酮
• 3.4 香椿叶总黄酮产品的鉴定与分析
• 3.4.1 香椿总黄酮组成成份的TLC初步定性研究
• 3.4.2 香椿总黄酮组成成份的HPLC初步定性研究
• 3.4.3 香椿叶总黄酮成分的HPLC/MS/MS分析
• 3.5 香椿叶总黄酮体外抑制黄嘌呤氧化酶活性试验
• 3.6 香椿黄酮提取物对高尿酸血症小鼠SUA水平的影响
• 4.结论
• 5.展望
• 6.参考文献
• 7.攻读硕士学位期间发表论文情况
• 8.致谢