论文摘要
我国是肝癌大国,目前最常用的肝癌筛查指标是血清中甲胎蛋白（AFP）水平,然而其敏感性不高,北京协和医院的肝细胞癌患者的AFP敏感性仅为45.8%（＞200ng/ml）。近年来,美国一组科学家发现高尔基体蛋白73（GP73）有可能成为更好的诊断肝癌尤其是早期肝癌的血清标志物。我们的初步研究提示GP73诊断临床肝癌的敏感性和特异性分别高达77%和93%,可以作为肝癌早期诊断的标志物。但GP73在肝癌的发生和发展中的作用需要阐明。为了制备临床大规模检测GP73所需的抗体诊断试剂盒,我们首先要表达GP73抗原。本实验第一部分首先将GP73 cDNA分成N端和C端进行扩增,并将这两段目的基因连接到原核表达载体pET29a+中,成功构建了两种原核表达载体pET29a+-GP73 N和pET29a+-GP73 C重组质粒,并将其转化到原核表达大肠杆菌Rosetta（DE3）中获得GP73-N/C重组工程菌。转化菌株经诱导后表达GP73-N端和C端蛋白,目前经亲和层析纯化后正在注入小鼠和鸡体内用于制备单克隆和多克隆抗体,从而为临床常规检测GP73奠定了基础。为了探讨GP73和肝癌发生发展之间的关系,本实验第二部分首先扩增了人GP73基因,连接到逆转录病毒载体pLXIN-hyg中,成功构建了pLXIN-Hyg-GP73重组质粒,将其转染病毒包装细胞PT67,然后在低表达GP73的肝癌细胞系HepG2中,通过稳定病毒转染技术使之过量表达GP73,通过细胞计数发现GP73有促进细胞增殖的能力,提示GP73可能参与肝癌发生发展。