导读:本文包含了平滑肌祖细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:S1P,心外膜祖细胞,平滑肌细胞,分化
平滑肌祖细胞论文文献综述
李郁[1]（2019）在《1-磷酸神经鞘氨醇诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的实验研究》一文中研究指出冠状动脉疾病已经成为目前威胁人类健康的主要疾病,冠状动脉血管平滑肌不仅在冠状动脉的发生发育中有着重要的作用,还参与了冠状动脉血管结构的组成及功能的发挥。因此,充分了解冠状动脉血管平滑肌细胞的起源对于探索更多更有效的冠状动脉血管疾病治疗方法有着重要的意义。心外膜祖细胞(Epicardial progenitor cells,EpiCs),是一个表达Tbx18、WT1和Tcf21等转录因子的祖细胞池,是心脏发育过程中第一、第二生心区的重要补充,因此也被认为是心脏的第叁心生区。心外膜祖细胞在心脏发育及血管的生成中具有不可或缺的作用。目前的研究发现心外膜祖细胞是冠状动脉血管平滑肌细胞的来源之一。同时还发现心外膜祖细胞还可以分化为成纤维细胞、内皮细胞、窦房结细胞等。S1P是一种具有多种生物学功能的脂质,主要通过与五种G蛋白偶联受体结合发挥作用。S1P受体在体内广泛分布,其中以S1P_1、S1P_2、S1P_3叁种受体的分布最为广泛,在心血管系统的发生发育中具有重要的作用,还通过多种信号通路调节平滑肌细胞的功能,包括增殖、迁移、分化等功能。既往的研究发现S1P可以诱导脂肪来源的间质细胞及中胚层成血管细胞分化为平滑肌细胞。心外膜祖细胞具有分化为平滑肌细胞的潜能,而S1P可以诱导细胞分化为平滑肌细胞,进而我们推测S1P可能具有诱导心外膜祖细胞分化为平滑肌细胞的功能,明确S1P这一诱导分化作用对寻找新的冠状动脉血管疾病的治疗方法具有一定的临床价值。因此,在本研究中我们探索了S1P诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的作用,并检测了可能参与这一作用S1P受体。第一部分:心外膜祖细胞的提取及鉴定目的:建立体外E11.5天心外膜祖细胞的培养模型,检测培养心外膜祖细胞上S1P受体的表达情况,为探讨心外膜祖细胞的分化作用做好研究基础。方法:通过获取E11.5天胚胎心室组织进行种植,并从组织边缘爬出心外膜祖细胞的方法建立心外膜祖细胞的体外培养模型。PCR及细胞免疫荧光的方法检测心外膜祖细胞特异性标志物Tbx18及WT1转录因子的表达。通过PCR的方法检测心外膜祖细胞上各S1P受体的表达情况。结果:实验提取的细胞高表达转录因子Tbx18及WT1,低表达cTnT,细胞形态呈“铺路石”样排列生长。提取细胞主要表达S1P_1、S1P_2、S1P_3受体,几乎不表达S1P_4、S1P_5受体。结论:实验所提取的原代细胞为心外膜祖细胞,且细胞纯度高,成功建立了心外膜祖细胞的体外培养模型。明确了S1P受体在心外膜祖细胞的表达,为之后探讨S1P通过其受体发挥的诱导分化作用奠定了研究基础。第二部分:S1P诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化目的:探讨S1P诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化及其机制。方法:建立心外膜祖细胞的体外培养模型,用不同浓度的S1P(0.1uM、0.5uM、1uM、2uM、5uM)处理细胞,通过qRT-PCR方法检测平滑肌细胞标志物α-SMA及MYH11的表达情况,筛选出S1P药物干预的最佳刺激浓度。将培养的心外膜祖细胞进行随机分组,即对照组、S1P组(0.5uM S1P)、S1P+JTE013组(0.5uM S1P+1uM JTE013)、S1P+VPC23019组(0.5uM S1P+1uM VPC23019),通过qRT-PCR及免疫荧光的方法检测平滑肌细胞标志物α-SMA及MYH11的表达情况,探索S1P_1、S1P_2、S1P_3受体抑制后对S1P诱导分化作用的作用。再次将培养细胞随机分组为:对照组、S1P组(0.5uM S1P)、SEW2871组(30uM SEW2871)及S1P+W146组(0.5uM S1P+10uM W146),通过qRT-PCR及免疫荧光的方法检测α-SMA及MYH11的表达情况,探讨S1P_1受体在诱导分化中的作用。制备叁维胶原凝胶模型,通过凝胶收缩实验观察不同处理方法干预细胞后胶原的收缩情况。结果:S1P药物干预心外膜祖细胞6天后,当S1P干预浓度为0.5uM时,α-SMA及MYH11的表达量达到峰值,说明0.5uM浓度为S1P干预的最佳刺激浓度。S1P_2受体的抑制剂JTE013和S1P_1/S1P_3受体的抑制剂VPC23019预处理心外膜祖细胞后,qRT-PCR检测发现这两种方式干预细胞后的α-SMA及MYH11表达量较单独S1P处理的表达量明显降低,且VPC23019处理后这两种平滑肌细胞标志物的表达量降低更加明显。细胞免疫荧光也得到了同样结果。S1P_1受体的激动剂SEW2871干预心外膜祖细胞后,mRNA水平α-SMA及MYH11表达量与对照组相比较并没有增加。用S1P_1受体抑制剂W146预处理心外膜祖细胞后,α-SMA及MYH11表达量较S1P组没有明显的差异。免疫荧光也支持上述结果。S1P处理后的细胞制备胶原凝胶,再用卡巴胆碱刺激后可见凝胶明显收缩。S1P+W146组的凝胶也明显收缩,S1P+JTE013组及S1P+VPC23019组凝胶未发生明显的收缩。SEW2871组凝胶未发生收缩。结论:S1P可以诱导心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,在S1P的诱导分化中S1P_3受体起主要作用,S1P_2受体起次要作用。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
刘亚杰[2]（2019）在《自噬参与心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化的实验研究》一文中研究指出研究冠脉血管的发育,明确冠脉血管平滑肌细胞(coronary smooth muscle cells,CoSMCs)的起源及分化机制,将为先天性心脏病的防治及心肌梗死后冠脉侧枝循环血管的形成等研究领域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖细胞(Epicardial progenitor cells,EPCs)是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具体机制尚不完全明确。自噬(autophagy)是由溶酶体介导的蛋白质及其他细胞器的分解过程,与衰老的细胞器及破坏的蛋白质的清除和维持细胞内环境稳定有密切关系。既往研究证实自噬在哺乳动物的心脏发育与重塑组织和细胞分化过程起着重要作用,但尚无证据表明自噬是否能够参与调控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我们成功体外培育了小鼠原代EPCs,并通过自噬的诱导和抑制实验观察自噬对EPCs向平滑肌细胞分化的影响,同时进一步在体观察自噬对小鼠冠脉平滑肌发育的影响,以期证实自噬参与调控心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化。第一部分:原代EPCs的培养与鉴定目的:探讨构建高纯度心外膜祖细胞的方法,为体外培养并揭示心外膜祖细胞的分化机制奠定基础。方法:首先分离E11.5小鼠胚胎心脏,利用组织贴壁法建立心外膜祖细胞体外培养模型。镜下观察培养细胞的自身特性,进一步通过qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测心外膜祖细胞标志基因Tbx18及WT1基因的表达,借此来检测培养的细胞纯度。结果:成功培养出原代心外膜祖细胞群。并首先以形态学观察证实该原代细胞群具有典型上皮形态,并连续观察72小时证实该细胞群分化的形态学变化。进一步以心肌细胞为对照组,通过qPCR及免疫荧光证实该细胞能同时表达心外膜祖细胞标志性基因Tbx18及WT1。结论:通过组织贴壁法进行原代培养所得心外膜祖细胞方法相对简单且同时表达多个心外膜上皮标志基因,细胞纯度高。体外培养的原代心外膜祖细胞爬出后形成的细胞群形态和排列均呈典型上皮形态,且在形态学上观察到能够进一步分化,为后续心外膜祖细胞的分化研究打下基础。第二部分:体外实验揭示细胞自噬对心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响目的:探讨细胞自噬对心外膜心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响,及对EPCs分化而来的SMCs功能的影响。方法:在原代心外膜祖细胞模型店基础上,用自噬诱导剂RAPA及抑制剂3-MA分别建立了自噬诱导和抑制模型。观察自噬诱导/抑制对心外膜祖细胞分化的形态学影响,并通过qPCR测定自噬相关Akt及mTOR的mRNA水平变化。进一步通过MDC染色及LC3B蛋白荧光染色及Westernblot实验揭示心外膜祖细胞分化过程是否细胞自噬。后以qPCR及免疫荧光检测培养72h后细胞平滑肌标志蛋白a-SMA及MYH11水平,MTT实验检测各组细胞增殖能力。再收集培养96h细胞,以胶原凝胶收缩实验评价其收缩功能,划痕实验评价细胞迁移能力。结果:我们的实验观察到,RAPA在72h内显着诱导心外膜祖细胞自噬水平上调,进而导致心外膜祖细胞增殖明显减慢,但长梭形大体积异形细胞增多。免疫荧光染色见RAPA组a-SMA及MYH11峰值提前,提示自噬可能诱导心外膜祖细胞提前分化,在细胞培养48h即出现大量梭形,异形的分化细胞,结合免疫染色结果可见RAPA诱导的自噬使平滑肌细胞的分化提前,但增殖较NORMAL组及3-MA组明显减弱。而在3-MA组其自噬水平明显下调后,出现细胞增殖及迁移上调,而分化延迟的表现。提示抑制自噬可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。结论:细胞自噬参与调控心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,自噬上调可能诱导心外膜祖细胞提前分化,而使平滑肌细胞收缩能力增强,增殖迁移能力下降,而抑制则可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。第叁部分:体内实验揭示自噬对小鼠冠状动脉发育的影响目的:在组织水平明确心外膜祖细胞对冠脉血管平滑肌发育的影响及自噬标识信号分子与平滑肌标志基因的空间定位关系,从而在体探讨自噬对心外膜祖细胞对冠状动脉发育的影响。方法:应用羊膜腔注射给药的方式建立小鼠自噬诱导/抑制模型,通过HE染色观察自噬诱导/抑制对小鼠E12.5-E14.5冠脉发育的结构影响,通过qPCR及免疫荧光观察自噬对小鼠冠状动脉平滑肌分化过程中a-SMA的RNA及蛋白表达的影响,进而将自噬标志蛋白LC3B与平滑肌细胞标志蛋白MYH11共染,观察两者的空间定位关系。结果:自噬诱导后,心脏几乎未能形成管腔发育成熟的冠状动脉血管,但可见心内膜下逐渐出现的血窦样变化,提示小鼠心脏发育未能发育出成熟冠脉及建立有效的冠脉循环。同时亦观察到自噬诱导后出现的心室流出道发育障碍,心脏循环缺陷及心室壁变薄。qPCR及组织免疫荧光结果提示,小鼠E12.5-14.5的自噬现象可同时出现在心外膜及心肌组织中。而自噬诱导组我们可见在E12.5天时,心外膜内的心肌组织中a-SMA的表达量略高于NORMAL组,但在E14.5天时,RAPA组a-SMA表达量明显低于NORMAL组,并且未能发育为成熟冠状动脉管腔。而在E12.5-14.5天,自噬抑制组a-SMA表达量各时间段均低于NORMAL组,最终冠状动脉周围a-SMA表达量也比NORMAL组更低。荧光共染实验证实,多处心外膜及心外膜下MYH11阳性细胞能够与LC3B蛋白共表达。结论:自噬在冠脉发育中需要适宜的强度。过度激活自噬可能导致导平滑肌细胞的提前分化和迁移能力增强,有可能使内皮细胞周围平滑肌细胞的募集失调,不能形成有效的冠脉管腔。总体来说,冠状动脉发育受到抑制。而自噬抑制可能使心外膜祖细胞分化延迟,从而使冠脉形成的数量减少。心外膜祖细胞向冠脉平滑肌分化的过程需要适宜的自噬强度。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
李英瑞[3]（2019）在《共培养诱导心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞》一文中研究指出冠状动脉在维持心脏正常生理功能中发挥着重要作用,而冠状动脉血管平滑肌对调节冠状动脉血流和结构支持有着重要意义。因此,了解冠状动脉平滑肌细胞起源和分化过程的机制具有重要意义。心外膜祖细胞(EpiCs)是从前体心外膜细胞发育而来,是覆盖脊椎动物心脏最外层的上皮细胞。在心脏的发育中发挥重要作用,抑制心外膜生长可导致心肌和冠状动脉发育异常。EpiCs在发育过程中经历上皮细胞向间充质细胞转化(EMT),在心外膜下区域形成心外膜来源的细胞(EPDCs),并可在各种因素影响下分化为冠状动脉平滑肌细胞。有研究证实部分冠状动脉发育始于内皮细胞在心外膜下区域形成原始管道,原始管道通过内皮细胞出芽作用自心外膜下延伸至心内膜,最终连接到主动脉以获得血流,然后内皮细胞促进其周围基质细胞分化为血管平滑肌细胞,并最终形成成熟的冠状动脉。最近的研究提示EpiCs可作为心肌梗死后进行心脏细胞移植的候选细胞,因为它们具有多种特殊的特性,包括在心脏发育过程中作为祖细胞的作用。但迄今为止,很少有研究探讨EpiCs及其衍生物作为细胞移植的候选材料。这在一定程度上是由于对EpiCs体内分化机制的不了解和其特异性的分离培养技术所造成的。本研究旨在使用Transwell共培养法,探讨冠脉发育过程中,血管内皮细胞是否可以影响EpiCs的分化从而调节冠状动脉的发育,为心脏疾病的治疗提供新的思路。第一部分心外膜祖细胞的培养与鉴定目的:通过饲养C57BL/6小鼠成功培养小鼠E12.5d的胚胎EpiCs,为研究EpiCs分化为血管平滑肌细胞的机制提供研究基础。方法:将C57BL/6小鼠以1雄2雌进行合笼,在孕鼠E12.5d时提取胚胎小鼠的EpiCs,通过免疫荧光染色和qRT-PCR检测EpiCs特异标志物Wt1和Tbx18的表达。结果:提取的原代细胞高表达EpiCs特异性标志物Wt1和Tbx18,并结合其细胞生长形态,证实EpiCs被成功提取且纯度较高。结论:通过饲养C57BL/6小鼠成功提取培养出EpiCs。第二部分共培养诱导心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞目的:通过共培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)与EpiCs,诱导EpiCs分化为血管平滑肌细胞。方法:将提取的EpiCs分为实验组和对照组。实验组通过Transwell共培养系统共培养HUVECs和EpiCs。通过免疫荧光染色和qRT-PCR检测血管平滑肌细胞特异性标志物α-平滑肌肌球蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、肌球蛋白重链11(Myosin heavy chain 11,Myh11)在实验组和对照组之间的差异,胶原凝胶收缩实验检测共培养后EpiCs的收缩能力,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测共培养后碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factors,bFGFs)在条件培养基中的差异。结果:共培养干预后,实验组EpiCs的α-SMA、Myh11表达明显增多,mRNA水平显着增加。在胶原凝胶收缩实验中,实验组EpiCs的收缩能力强于对照组。同时,bFGFs的浓度在实验组条件培养基中高于对照组。结论:HUVECs可影响EpiCs向小鼠血管平滑肌细胞的分化,而bFGFs在此过程中起着重要作用。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
李英瑞,李郁,景小东,刘亚杰,赵郑波[4]（2019）在《共培养诱导心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化》一文中研究指出目的探讨冠脉发育过程中,血管内皮细胞是否可以影响心外膜祖细胞(epicardial progenitor cells,EpiCs)的分化从而调节冠状动脉的发育。方法饲养7～8周龄成年C57BL/6小鼠60只(雌、雄各半,体质量25～30 g)。提取出高纯度的EpiCs,实验分为对照组与共培养组,通过Transwell共培养系统探讨血管内皮细胞和EpiCs间的相互作用,采用细胞免疫荧光技术和荧光定量PCR分别检测EpiCs标志物WT1和Tbx18、平滑肌细胞标志物α-SMA和Myh11的蛋白表达与mRNA表达;胶原凝胶收缩实验检测细胞收缩能力;ELISA实验检测培养基中生长因子的表达。结果与对照组比较,共培养系统下血管内皮细胞可促进EpiCs中α-SMA[(1.73±0.85)%vs(34.20±3.38)%,P<0.01,n=3]与Myh11[(3.70±1.49)%vs(45.63±4.85)%,P<0.01,n=3]的表达并增强EpiCs的收缩能力,并且对共培养条件培养基的检测可见在此过程中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factors,bFGFs)的升高[(87.64±8.78)vs(304.96±52.91)pg/mL,P<0.01,n=3]。结论血管内皮细胞可通过分泌bFGFs调节EpiCs向血管平滑肌细胞的分化,从而调节冠状动脉的发育。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2019年06期）
汪文斌,韩悦,齐颖新[5]（2018）在《周期性张应变条件下血管平滑肌细胞对内皮祖细胞分化的影响》一文中研究指出目的血管内膜层受损后,血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)暴露。内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)被募集并黏附到受损血管处,与损伤处的VSMCs接触。研究力学条件下细胞间信息交流在EPCs参与血管损伤修复过程中的作用。方法 应用FX-5000T周期性张应变加载系统(5%、1.25 Hz)作用于VSMCs,并与EPCs进行联合培养,或RNAi技术干扰VSMCs中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF);用CTGF重组蛋白(r-CTGF)体外刺激EPCs,检测EPCs分化水平。结果 5%、1.25 Hz(本文来源于《第十二届全国生物力学学术会议暨第十四届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编》期刊2018-08-17）
何灿粲,计晓娟,余更生,毕杨,朱旭[6]（2017）在《过表达趋化因子受体4的内皮祖细胞影响血管平滑肌细胞迁移、增殖》一文中研究指出目的研究过表达趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移、增殖的影响。方法分离培养并鉴定大鼠骨髓来源EPCs。CXCR4的重组腺病毒感染EPCs后,流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测细胞膜CXCR4受体及mRNA表达,CCK-8法、Transwell法分别检测EPCs增殖活性、迁移能力。建立过表达CXCR4的EPCs与VSMCs非接触共培养模型,Transwell法、CCK-8法检测EPCs对VSMCs的迁移、细胞存活的影响。结果 CXCR4重组腺病毒感染EPCs 48 h后,EPCs细胞膜CXCR4受体和mRNA表达明显增高(P<0.01),过表达CXCR4对EPCs增殖活性无明显影响,但可增强EPCs定向迁移能力(P<0.01)。共培养模型中,SDF-1α诱导下,CXCR4组VSMCs迁移、细胞存活率明显降低(P<0.05),无SDF-1α诱导下空白对照组、GFP组及CXCR4组VSMCs的迁移、细胞存活率整体高于SDF-1α诱导下各组(P<0.05)。结论过表达CXCR4可增强EPCs的迁移能力,在SDF-1/CXCR4调控轴中加强EPCs对VSMCs迁移和增殖的抑制作用,可用于防治血管再狭窄的细胞治疗。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2017年15期）
陈兆雷[7]（2017）在《平滑肌祖细胞在动静脉内瘘静脉流出道内膜增生中的作用及调控机制研究》一文中研究指出第一部分流出道侧静脉内膜中平滑肌样细胞在自体动静脉内瘘失功中的作用及细胞炎症因子在增生静脉内膜中的表达情况目的研究接近吻合口的流出道侧静脉内膜平滑肌样细胞在自体动静脉内瘘失功中的作用,并研究细胞炎症因子在静脉内膜中的表达情况,推测其可能的调控机制。方法通过对人体AVF失功的静脉侧标本的研究,用免疫组化方法观察血管病变中的组织学改变,采用PCR及Western blot等方法对静脉内膜中的主要细胞炎症因子进行筛查,并对其表达水平进行检测,分析细胞炎症因子对静脉内膜增生的可能调节作用。结果AVF流出道侧静脉的内膜增生明显导致血管壁增厚(中位内膜厚度>67.3μm),内膜中可见大量的平滑肌样细胞及少量炎症细胞;静脉壁中RANTES及MCP-1、VEGF-A的表达明显升高,尤以RANTES及MCP-1明显;早期的细胞因子主要由炎症细胞分泌,而中后期可能由平滑肌样细胞自身分泌以维持平滑肌样细胞的持续增生。结论AVF失功的主要原因为流出道侧静脉内膜增生所致,增生内膜中以平滑肌样细胞为主并含有少量炎症细胞。平滑肌样细胞可能通过分泌RANTES及MCP-1等细胞炎症因子以维持内膜的中后期持续增生。第二部分MicroRNA-155通过对平滑肌样细胞表达RANTES的调控促进动静脉内瘘的静脉内膜增生目的研究miR-155对动静脉瘘流出道侧静脉内膜中平滑肌样细胞增生的调控机制。方法建立C57BL/6小鼠与C57BL/6背景的miR-155基因敲除鼠的颈动脉-颈外静脉的动静脉瘘动物模型。在AVF术后第1、2、3、4周等获取静脉侧标本,通过免疫组化研究静脉内膜的组织学改变,并分别通过PCR及Western blot方法在mRNA及蛋白水平分析内膜中细胞炎症因子的变化及平滑肌样细胞的增生情况。在体外实验中观察miR-155对于内膜中细胞炎症因子表达的调控及对平滑肌样细胞的影响。结果miR-155基因敲除能够显着降低平滑肌样细胞RANTES等细胞炎症因子表达,抑制平滑肌样细胞的增生,减轻内膜增生,降低AVF血管壁的狭窄性塑形。在miR-155~(-/-)小鼠的AVF中,静脉内膜中多种细胞炎症因子的表达明显降低,miR-155能够促进平滑肌样细胞中的RANTES的表达,促进内膜中平滑肌样细胞的增生及细胞外基质的表达。miR-155可通过ERK和NF-κB途径对RANTES的表达进行调控。结论miR-155通过ERK和NF-κB途径促进SMLCs表达RANTES来间接促进平滑肌样细胞的增生和细胞外基质的表达,导致内膜增生。第叁部分AVF中静脉外膜中的平滑肌祖细胞可内迁、分化为内膜中的平滑肌样细胞目的研究自体动静脉内瘘流出道侧静脉中平滑肌样细胞的来源,以及平滑肌祖细胞在AVF静脉内膜增生中的作用与迁移、增殖、分化机制。方法建立C57BL/6小鼠的自体动静脉内瘘的模型,以及C57BL/6小鼠与eGFP/转基因小鼠交叉骨髓移植后建立AVF模型,动态检测静脉内膜中炎症细胞及平滑肌细胞的标志物,明确内膜中的平滑肌样细胞的来源,用流式分选法将外膜中非骨髓源性eGFP阳性细胞进行分离培养,在体外进行诱导、分化,并进行干细胞标志Sca-1标记检测,对该群细胞进行鉴定,分析该群细胞迁移、分化、增生的机制。结果外膜中非骨髓来源的细胞具有祖细胞性质,可表达干细胞的标志Sca-1,能够迁移至内膜并分化成平滑肌样细胞;平滑肌祖细胞表达早期平滑肌细胞标志物SM-22α,但是不表达SM-MHC;miR-155可以通过调控RANTES的表达促进平滑肌祖细胞向内迁移、增殖及向平滑肌样细胞分化的能力。结论血管外膜中非骨髓细胞来源的平滑肌祖细胞可在细胞炎症因子作用下向AVF静脉内膜中迁移、分化为平滑肌样细胞并增殖。miR155可以通过对细胞炎症因子的调节对该过程进行间接的调控。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-05-01）
秦琴[8]（2017）在《血管紧张素Ⅱ诱导小鼠胚胎心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究》一文中研究指出目前,冠心病仍是世界上最常见的死亡原因,严重威胁人类的健康。研究冠状动脉的发育,对于冠心病的防治以及人类的健康保障具有重要意义。心外膜祖细胞(epicardial progenitor cells;Epi Cs)是最近提出的一组心脏祖细胞,起源于前体心外膜祖细胞,是一个表达Tbx18、Wt1、Tcf21等多种标记基因的祖细胞池。因其可分化形成血管平滑肌细胞、成纤维细胞、窦房结起搏细胞等多种心系细胞,对胚胎心脏的形成起重要作用,成为目前心肌再生研究的一个焦点。目前已有大量研究证实心外膜祖细胞是冠状动脉血管平滑肌细胞的主要来源之一,且参与该分化过程的机制众多。血管紧张素Ⅱ(Angiontensin II;Ang II)作为肾素-血管紧张素-醛固酮系统中最重要的效应分子,主要通过Ang II受体AT1、AT2起作用,除了本身固有的体液调节功能外,还是一个生长调节因子,与细胞的生长、发育、分化及调亡均密切相关。除此之外,大量研究发现AngⅡ可以诱导脂肪干细胞、骨髓间充质干细胞、等分化为平滑肌细胞。因此明确AngⅡ对心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞分化的作用具有重要的临床意义。第一部分:心外膜祖细胞的培养及鉴定目的:在体外成功培养C57BL/6小鼠E12.5d胚胎心外膜祖细胞,为体外研究心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化机制奠定基础。方法:分离小鼠E12.5d胚胎心脏组织进行原代细胞培养得到心外膜祖细胞,并通过细胞免疫荧光方法检测Epi Cs细胞特异性标志物Tbx18、Wt1的表达。结果:所培养的原代细胞高度表达Tbx18、Wt1,结合其来源和形态证实成功培养出心外膜祖细胞。结论:利用C57BL/6小鼠E12.5d胚胎心脏组织能成功培养出心外膜祖细胞。第二部分:Ang II通过受体AT1诱导心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化目的:探讨Ang II诱导心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化及相关通路。方法:细胞免疫荧光检测心外膜祖细胞表面AngⅡ作用受体AT1、AT2的表达。培养得到的原代心外膜祖细胞随机分为AngⅡ组、AngⅡ+氯沙坦组、AngⅡ+PD123319组和对照组进行干预。免疫荧光检测血管平滑肌细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(alpha-sooth muscle actin,α-SMA)、肌球蛋白重链11(Myosin heavy chain 11,Myh11)在各组的表达情况,实时荧光定量PCR检测α-SMA、Myh11在各组的m RNA表达水平,胶原凝胶收缩实验分别检测干预后细胞的收缩功能。结果:心外膜祖细胞膜表面有AngⅡ受体AT1、AT2的表达,给予AngⅡ干预7天后实验组α-SMA、Myh11的表达明显增多,其m RNA水平明显高于对照组,经AngⅡ诱导的细胞在卡巴胆碱的作用下也展示了明显的收缩性。氯沙坦阻断AngⅡ受体AT1后,AngⅡ干预使心外膜祖细胞的α-SMA、Myh11表达下降;PD123319阻断AngⅡ受体AT2后,AngⅡ干预对α-SMA、Myh11表达没有明显影响。结论:血管紧张素Ⅱ可以通过受体AT1有效诱导小鼠心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2017-05-01）
刘艳霞,张坡,朱鲜阳,黄岚[9]（2016）在《辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞P27蛋白表达的不同影响》一文中研究指出目的观察辛伐他汀对平滑肌祖细胞(smooth muscle progenitor cell,SPC)和内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)p27蛋白表达的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物。方法采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度辛伐他汀(0.01~10μmol/L)培养24 h后,平滑肌肌动脉蛋白免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC,激光共聚焦显微镜鉴定异硫氰酸荧光素(FITC)结合的植物凝集素(FITC-UEA-Ⅰ)和Di I结合的乙酰化低密度脂蛋白(Di I-ac LDL)双染阳性细胞为正在分化的EPC,Western blot检测p27蛋白的表达。结果辛伐他汀浓度依赖性促进SPC细胞p27表达,0.1μmol/L辛伐他汀即可上调p27表达(n=5,P<0.01)。与SPC相反,辛伐他汀浓度依赖性抑制EPC细胞p27表达,0.01μmol/L辛伐他汀即可下调p27表达(n=5,P<0.01)。结论辛伐他汀选择性上调SPC的p27表达,下调EPC的p27表达,局部应用有抑制再狭窄和促进损伤血管再内皮化可能。(本文来源于《岭南心血管病杂志》期刊2016年06期）
王晴,李和权,周建英[10]（2016）在《小鼠平滑肌祖细胞培养及其体内外迁移功能的研究》一文中研究指出目的建立一种有效的小鼠平滑肌祖细胞的培养方法,并对其迁移功能进行研究。方法使用C57BL/6小鼠制备密质骨来源间充干细胞,PDGF-BB诱导其分化并采用形态学观察、免疫细胞化学染色及流式分析的方法进行鉴定。使用Transwell小室及流式分析方法检测其迁移能力。结果 PDGF-BB诱导7 d后,镜下可见细胞呈长梭型,免疫细胞化学染色显示开始表达α-SMA。诱导21 d后,流式分析证实70%以上的细胞表达CD34+/α-SMA+双阳性,58.5%细胞开始表达SM-MHC。迁移实验表明,培养得到的平滑肌祖细胞在体内外均具有良好的迁移能力。结论通过使用密质骨来源间充干细胞制备平滑肌祖细胞具有操作简便、获取率高及培养周期短等优点,培养得到的平滑肌祖细胞在体内外均具有迁移能力,适于进行后续功能及机制研究。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2016年07期）
平滑肌祖细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究冠脉血管的发育,明确冠脉血管平滑肌细胞(coronary smooth muscle cells,CoSMCs)的起源及分化机制,将为先天性心脏病的防治及心肌梗死后冠脉侧枝循环血管的形成等研究领域提供重要信息。目前研究提示,心外膜祖细胞(Epicardial progenitor cells,EPCs)是CoSMCs的主要起源,但EPCs向CoSMCs分化的具体机制尚不完全明确。自噬(autophagy)是由溶酶体介导的蛋白质及其他细胞器的分解过程,与衰老的细胞器及破坏的蛋白质的清除和维持细胞内环境稳定有密切关系。既往研究证实自噬在哺乳动物的心脏发育与重塑组织和细胞分化过程起着重要作用,但尚无证据表明自噬是否能够参与调控EPCs向CoSMCs分化。在本研究中,我们成功体外培育了小鼠原代EPCs,并通过自噬的诱导和抑制实验观察自噬对EPCs向平滑肌细胞分化的影响,同时进一步在体观察自噬对小鼠冠脉平滑肌发育的影响,以期证实自噬参与调控心外膜祖细胞向冠状动脉平滑肌细胞分化。第一部分:原代EPCs的培养与鉴定目的:探讨构建高纯度心外膜祖细胞的方法,为体外培养并揭示心外膜祖细胞的分化机制奠定基础。方法:首先分离E11.5小鼠胚胎心脏,利用组织贴壁法建立心外膜祖细胞体外培养模型。镜下观察培养细胞的自身特性,进一步通过qRT-PCR技术及免疫荧光技术检测心外膜祖细胞标志基因Tbx18及WT1基因的表达,借此来检测培养的细胞纯度。结果:成功培养出原代心外膜祖细胞群。并首先以形态学观察证实该原代细胞群具有典型上皮形态,并连续观察72小时证实该细胞群分化的形态学变化。进一步以心肌细胞为对照组,通过qPCR及免疫荧光证实该细胞能同时表达心外膜祖细胞标志性基因Tbx18及WT1。结论:通过组织贴壁法进行原代培养所得心外膜祖细胞方法相对简单且同时表达多个心外膜上皮标志基因,细胞纯度高。体外培养的原代心外膜祖细胞爬出后形成的细胞群形态和排列均呈典型上皮形态,且在形态学上观察到能够进一步分化,为后续心外膜祖细胞的分化研究打下基础。第二部分:体外实验揭示细胞自噬对心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响目的:探讨细胞自噬对心外膜心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化的影响,及对EPCs分化而来的SMCs功能的影响。方法:在原代心外膜祖细胞模型店基础上,用自噬诱导剂RAPA及抑制剂3-MA分别建立了自噬诱导和抑制模型。观察自噬诱导/抑制对心外膜祖细胞分化的形态学影响,并通过qPCR测定自噬相关Akt及mTOR的mRNA水平变化。进一步通过MDC染色及LC3B蛋白荧光染色及Westernblot实验揭示心外膜祖细胞分化过程是否细胞自噬。后以qPCR及免疫荧光检测培养72h后细胞平滑肌标志蛋白a-SMA及MYH11水平,MTT实验检测各组细胞增殖能力。再收集培养96h细胞,以胶原凝胶收缩实验评价其收缩功能,划痕实验评价细胞迁移能力。结果:我们的实验观察到,RAPA在72h内显着诱导心外膜祖细胞自噬水平上调,进而导致心外膜祖细胞增殖明显减慢,但长梭形大体积异形细胞增多。免疫荧光染色见RAPA组a-SMA及MYH11峰值提前,提示自噬可能诱导心外膜祖细胞提前分化,在细胞培养48h即出现大量梭形,异形的分化细胞,结合免疫染色结果可见RAPA诱导的自噬使平滑肌细胞的分化提前,但增殖较NORMAL组及3-MA组明显减弱。而在3-MA组其自噬水平明显下调后,出现细胞增殖及迁移上调,而分化延迟的表现。提示抑制自噬可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。结论:细胞自噬参与调控心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,自噬上调可能诱导心外膜祖细胞提前分化,而使平滑肌细胞收缩能力增强,增殖迁移能力下降,而抑制则可能抑制心外膜祖细胞向平滑肌细胞分化,而促进其增殖及迁移。第叁部分:体内实验揭示自噬对小鼠冠状动脉发育的影响目的:在组织水平明确心外膜祖细胞对冠脉血管平滑肌发育的影响及自噬标识信号分子与平滑肌标志基因的空间定位关系,从而在体探讨自噬对心外膜祖细胞对冠状动脉发育的影响。方法:应用羊膜腔注射给药的方式建立小鼠自噬诱导/抑制模型,通过HE染色观察自噬诱导/抑制对小鼠E12.5-E14.5冠脉发育的结构影响,通过qPCR及免疫荧光观察自噬对小鼠冠状动脉平滑肌分化过程中a-SMA的RNA及蛋白表达的影响,进而将自噬标志蛋白LC3B与平滑肌细胞标志蛋白MYH11共染,观察两者的空间定位关系。结果:自噬诱导后,心脏几乎未能形成管腔发育成熟的冠状动脉血管,但可见心内膜下逐渐出现的血窦样变化,提示小鼠心脏发育未能发育出成熟冠脉及建立有效的冠脉循环。同时亦观察到自噬诱导后出现的心室流出道发育障碍,心脏循环缺陷及心室壁变薄。qPCR及组织免疫荧光结果提示,小鼠E12.5-14.5的自噬现象可同时出现在心外膜及心肌组织中。而自噬诱导组我们可见在E12.5天时,心外膜内的心肌组织中a-SMA的表达量略高于NORMAL组,但在E14.5天时,RAPA组a-SMA表达量明显低于NORMAL组,并且未能发育为成熟冠状动脉管腔。而在E12.5-14.5天,自噬抑制组a-SMA表达量各时间段均低于NORMAL组,最终冠状动脉周围a-SMA表达量也比NORMAL组更低。荧光共染实验证实,多处心外膜及心外膜下MYH11阳性细胞能够与LC3B蛋白共表达。结论:自噬在冠脉发育中需要适宜的强度。过度激活自噬可能导致导平滑肌细胞的提前分化和迁移能力增强,有可能使内皮细胞周围平滑肌细胞的募集失调,不能形成有效的冠脉管腔。总体来说,冠状动脉发育受到抑制。而自噬抑制可能使心外膜祖细胞分化延迟,从而使冠脉形成的数量减少。心外膜祖细胞向冠脉平滑肌分化的过程需要适宜的自噬强度。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
平滑肌祖细胞论文参考文献
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[3].李英瑞.共培养诱导心外膜祖细胞分化为血管平滑肌细胞[D].重庆医科大学.2019
[4].李英瑞,李郁,景小东,刘亚杰,赵郑波.共培养诱导心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞的分化[J].第叁军医大学学报.2019
[5].汪文斌,韩悦,齐颖新.周期性张应变条件下血管平滑肌细胞对内皮祖细胞分化的影响[C].第十二届全国生物力学学术会议暨第十四届全国生物流变学学术会议会议论文摘要汇编.2018
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[7].陈兆雷.平滑肌祖细胞在动静脉内瘘静脉流出道内膜增生中的作用及调控机制研究[D].苏州大学.2017
[8].秦琴.血管紧张素Ⅱ诱导小鼠胚胎心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞分化的实验研究[D].重庆医科大学.2017
[9].刘艳霞,张坡,朱鲜阳,黄岚.辛伐他汀对大鼠平滑肌祖细胞和内皮祖细胞P27蛋白表达的不同影响[J].岭南心血管病杂志.2016
[10].王晴,李和权,周建英.小鼠平滑肌祖细胞培养及其体内外迁移功能的研究[J].中国药理学通报.2016