三羟异黄酮与RNA干扰survivin基因联合应用于DU-145前列腺癌细胞的实验研究

论文摘要

三羟异黄酮（genistein）是大豆异黄酮中一种重要的非营养成分。大量的体内和体外研究证实它可以抑制多种肿瘤如胃癌、乳癌、结肠癌等。RNA干扰（RNA interference，RNAi）是一项能有效而特异地抑制基因表达的新技术，已广泛应用于抗肿瘤的研究。为了研究genistein与RNA干扰survivin联合使用在抑制前列腺癌细胞增殖，诱导凋亡中的作用，本文通过MTT、细胞计数法和荧光显微镜分别检测genistein对DU-145细胞增殖和细胞凋亡的影响；构建siRNA表达重组质粒pU6+27-survivin，并转染DU-145细胞，RT-PCR检测细胞中survivin基因的mRNA表达；MTT法和流式细胞仪（Fluorescein Activated Cell Sorter，FACS）分别检测genistein与RNA干扰survivin联合使用对细胞增殖和细胞周期的影响。实验结果表明：随着genistien浓度和/或作用时间增大，DU-145和Hela细胞相对活力明显下降。相同浓度的genistein对Hela细胞增殖的抑制率均高于其对DU-145细胞的抑制率。重组质粒转染组DU-145细胞相对活力比genistein处理组DU-145细胞相对活力要低，genistein和重组质粒转染联合处理的DU-145细胞相对活力最低。重组质粒转染组较genistein组诱导DU-145细胞凋亡的效果好。重组质粒转染和genistein联合使用组诱导DU-145细胞凋亡的效果明显高于genistein组和重组质粒转染组分别作用的效果。重组质粒转染和genistein联合使用时，随着genistein浓度的升高，其诱导细胞凋亡的作用增强。综上所述，genistein能够抑制前列腺癌DU-145细胞增殖、诱导凋亡，并呈一定的时间和剂量依赖性，但是与Hela细胞相比抑制效果不佳；genistein与RNA干扰survivin基因联合使用能够显著的抑制DU-145细胞增殖，诱导细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 致谢
• 第一章 绪论
• 1.1 三羟异黄酮和肿瘤
• 1.1.1 简介
• 1.1.2 genistein对癌症抑制机制的研究进展
• 1.1.3 小结
• 1.2 survivin和肿瘤
• 1.2.1 survivin简介
• 1.2.2 survivin的结构
• 1.2.3 survivin在亚细胞中的分布
• 1.2.4 survivin的生物功能
• 1.2.5 RNAi技术抑制survivin基因表达在肿瘤治疗上的应用
• 1.2.6 结论和展望
• 1.3 研究背景
• 第二章 genistein对DU-145细胞增殖和凋亡的影响
• 2.1 材料
• 2.1.1 细胞株
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要溶液配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 药物配置
• 2.2.3 实验分组
• 2.2.4 MTT法测定不同浓度genistein对DU-145细胞增殖的影响
• 2.2.5 细胞计数法测定genistein对DU-145细胞增殖的影响
• 2.2.6 荧光显微镜观察DU-145细胞凋亡情况
• 2.3 结果
• 2.3.1 MTT法测定不同浓度genistein对DU-145细胞增殖的影响
• 2.3.2 细胞计数法测定genistein对DU-145细胞增殖的影响
• 2.3.3 genistein对DU-145细胞凋亡的影响
• 2.4 讨论
• 第三章 pU6+27-survivin质粒载体的构建与鉴定
• 3.1 材料
• 3.1.1 质粒
• 3.1.2 菌种
• 3.1.3 外源DNA
• 3.1.4 工具酶
• 3.1.5 主要仪器设备
• 3.1.6 主要试剂
• 3.1.7 主要溶液配置
• 3.2 方法
• 3.2.1 外源DNA的合成
• 3.2.2 质粒载体pU6+27 DNA抽提、双酶切及与目的片段连接
• 3.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
• 3.2.4 pU6+27-survivin质粒载体的酶切检测和测序
• 3.3 结果
• 3.3.1 重组质粒的双酶切鉴定结果
• 3.3.2 重组质粒的单酶切鉴定结果
• 3.3.3 重组质粒的测序结果分析
• 3.4 讨论
• 第四章 genistein和RNA干扰联合使用对于DU-145细胞增殖和周期的影响
• 4.1 材料
• 4.1.1 质粒
• 4.1.2 细胞株
• 4.1.3 主要仪器设备
• 4.1.4 主要试剂
• 4.1.5 主要溶液的配制
• 4.2 方法
• 4.2.1 细胞转染
• 4.2.2 RT-PCR检测survivin基因mRNA表达
• 4.2.3 MTT法测定genistein和RNAi对DU-145细胞增殖的影响
• 4.2.4 FACS检测genistein和RNAi对DU-145细胞凋亡的影响
• 4.3 结果
• 4.3.1 RT-PCR检测survivin基因mRNA表达
• 4.3.2 MTT法测定genistein和RNAi对DU-145细胞增殖的影响
• 4.3.3 FACS检测genistein和RNAi对DU-145细胞凋亡的影响
• 4.4 讨论
• 第五章 总结与展望
• 参考文献