论文题目: 端粒酶催化亚基TERT在小鼠配子发生中的表达检测及对EL-4淋巴瘤细胞增殖调节的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 动物学
作者: 张敏
导师: 奚耕思
关键词: 端粒酶催化亚基,精子发生,卵子发生,干涉,基因芯片,细胞周期
文献来源: 陕西师范大学
发表年度: 2005
论文摘要: 端粒位于真核细胞染色体末端,由串联排列的DNA重复序列和端粒结合蛋白构成,其作用为保护染色体末端并维护基因组稳定。端粒随细胞分裂次数的增加而不断缩短,当缩短到临界长度时就会导致细胞衰老、死亡。端粒酶是一种特殊的核糖核蛋白复合体,能以其自身RNA(TR)为模板反转录合成端粒重复序列,并将其加到染色体末端,从而恢复端粒功能,使细胞获得无限增殖能力。约90%以上的恶性肿瘤细胞都含有端粒酶活性,而仅有睾丸、卵巢组织及造血细胞系等少数正常组织细胞可检测到端粒酶活性。端粒酶催化亚基TERT是端粒酶活性的限制组分,在原发性肿瘤、癌细胞系和永生化细胞系中,TERT的表达与端粒酶活性的表达水平一致,与端粒酶的活化过程密切相关。端粒酶及TERT在哺乳动物配子发生过程中的表达特点目前尚存在争议,同时其在肿瘤细胞中的表达调控研究也是当今生命科学和医学研究的热点。 为了研究探讨端粒酶催化亚基TERT在正常生殖细胞中的表达特点和生物学意义,以及TERT与细胞周期相关基因的关系及其在肿瘤细胞增殖中的调控作用,本实验首先应用免疫组织化学和原位杂交技术,对不同年龄小鼠睾丸和卵巢不同分化类型的生殖细胞中TERT的表达进行了原位检测,并在此基础上应用RNA干涉和基因芯片等技术,对靶向TERT的RNA干涉后的小鼠EL-4淋巴瘤细胞进行细胞周期相关基因的表达谱分析,研究主要结果如下: 1.10天小鼠睾丸中含有精原细胞和支持细胞两种,未见TERT蛋白及mRNA阳性表达;20天小鼠睾丸中精原细胞有丝分裂和初级精母细胞减数分裂活跃,初级精母细胞尤其是粗线期精母细胞中有TERT阳性表达;30天小鼠睾丸生精上皮分化形成大量精子细胞,初级精母细胞(以粗线期精母细胞为主)和精子细胞均有TERT阳性表达;60天和90天小鼠睾丸曲细精管管腔进一步扩大,初级精母细胞和精子细胞中仍有TERT阳性表达,附睾中的成熟精子无TERT表达,同时精原细胞也始终无表达。TERT在精子发生过程中的表达存在着从弱到强再到弱的动态变化趋势,其表达与精子发生中减数分裂过程存在密切关系,并对各级生精细胞的增殖分化有重要的调节作用,从而保证了精子的端粒长度以及遗传物质的完整性和稳定性。
论文目录:
第一章 前言
1.端粒、端粒酶及端粒酶催化亚基
1.1 端粒的结构和功能
1.2 端粒酶及端粒酶催化亚基TERT
1.3 TERT的检测方法
2.配子发生中的端粒酶与TERT
2.1 精子发生中的端粒酶与TERT
2.2 卵子发生中的端粒酶
3.端粒酶的激活途径
3.1 Myc途径
3.2 E6／Myc途径
3.3 TSA对端粒酶活性上调的作用
3.4 SP1与Myc联合激活端粒酶
3.5 其它激活途径
4.端粒酶及TERT与肿瘤的关系
4.1 端粒酶活性与肿瘤诊断
4.2 端粒酶及TERT与细胞永生化及肿瘤形成
4.3 端粒酶抑制剂与癌症治疗
5.端粒酶与细胞周期
5.1 细胞周期及其调控
5.2 端粒酶与细胞周期和细胞周期调控因子
6.RNAi技术
6.1 RNAi的发现及概述
6.2 RNAi的作用(分子)机制
6.3 siRNA的设计原则
6.4 siRNA的制备
6.5 siRNA的转染
7.基因芯片技术及其在细胞周期调控研究中的应用
7.1 基因芯片概述
7.2 基因芯片在细胞周期调控研究中的应用
第二章 不同年龄小鼠睾丸中不同分化类型细胞的TERT表达检测
1.材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 实验方法
2.结果
2.1 免疫组织化学结果
2.2 原位杂交结果
2.3 图像分析及统计结果
3.讨论
4.小结
第三章 不同年龄小鼠卵巢中不同分化类型细胞的TERT表达检测
1.材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 实验方法
2.结果
2.1 免疫组织化学结果
2.2 原位杂交结果
2.3 图像分析及统计结果
3.讨论
4.小结
第四章 小鼠EL-4淋巴瘤细胞中靶向TERT的RNA干涉
1.材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 实验方法
2.结果
2.1 RT-PCR结果
2.2 Western blot结果
2.3 MTT结果
3.讨论
3.1 shRNA介导的mTERT表达抑制
3.2 mTERT的表达抑制对细胞生存力的影响
4.小结
第五章 TERT表达抑制对小鼠EL-4淋巴瘤细胞增殖的影响
1.材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂
1.3 实验方法
2.结果及验证
2.1 芯片杂交结果
2.2 RT-PCR实验验证
3.讨论
3.1 差异表达的细胞周期相关基因的分类
3.2 TERT的表达抑制对小鼠EL-4淋巴瘤细胞周期相关基因的影响
3.3 TERT的表达抑制对小鼠EL-4淋巴瘤细胞增殖的影响
4.小结
总结
参考文献
附录
附录Ⅰ：图版
附录Ⅱ：图表
致谢
攻读学位期间的研究成果
发布时间: 2005-07-19
参考文献
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