结合珠蛋白基因型及血浆水平与冠心病相关性研究

论文摘要

研究背景由于冠状动脉粥样硬化所致的心脏病常称为冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病,Coronary Heart Disease CHD）。其病理过程是在内皮损伤的基础上出现冠状动脉粥样硬化,进而产生粥样斑块,最终引起管腔狭窄甚至闭塞。内皮功能损伤、巨噬细胞浸润、泡沫细胞形成、平滑肌细胞增殖、血小板激活聚集以及血栓形成是其主要机制。氧化应激与炎症反应在这一过程中起到重要作用,其中炎性反应贯穿整个过程,越来越多的研究显示冠心病具有慢性炎症的特征。急性时相反应蛋白（Acute-phase-protein APP）包括C-反应蛋白、转铁蛋白、血浆铜蓝蛋白、结合珠蛋白（Haptoglobin）等,可用于鉴别急性、亚急性与慢性病理状态,在一定程度上与病理损伤的性质和范围也有相关。C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）目前在临床上已经应用的十分普遍,Framingham的风险积分表根据高敏C反应蛋白水平将心血管患者分为低、中、高危组。但是否其它ARP也能预测心血管疾病的发生危险以及心血管病的病变程度尚不清楚。结合珠蛋白（Haptoglobin, Hp）属于急性时相反应蛋白之一。它的主要功能是通过与游离血红蛋白（heamoglobin, Hb）结合形成Hp-Hb复合物,该复合物能通过胞吞作用被巨噬细胞或单核细胞表面所表达的CD163摄取,最终转化为可重复利用的铁离子和胆红素。Hp具有一定的抗氧化功能,其血清含量在肿瘤、炎症、创伤、感染、心肌梗塞等病理情况时常显著升高。Hp尚有抑制前列腺素合成、抑制细菌、促进血管生成及重要的免疫作用。Hp基因型分为Hp1-1、Hp2-2, Hp1-2三种。心血管病的发病、预后是否与Hp的基因型有关一直存有争议。国外很多大规模临床实验都表明：Hp2-2基因型的糖尿病患者更容易出现心血管并发症。其可能机制包括：不同基因型Hp其结构不同,功能上存在差异；糖尿病患者有其自身生理病理特点,Hp的抗氧化能力被削弱。在中国人群中,Hp基因型与合并冠心病的糖尿病患者的关系以及对冠心病病变程度一直未见报道。本实验室通过差异凝胶电泳筛选与心血管病发生相关蛋白质时,发现与健康人相比,心血管病患者血浆中Hp水平有明显差异。本研究对结合珠蛋白基因型及其血浆水平与冠心病的关系进行研究。研究目的1.研究冠心病组与对照组,结合珠蛋白（Haptoglobin, Hp）、高敏C-反应蛋白（hs-CRP）等血浆水平的变化,并探讨其与冠心病患者冠状动脉狭窄程度的相关性。2.研究冠心病组、糖尿病合并冠心病组与对照组结合珠蛋白基因型和基因频率分布的差异及不同基因型患者冠状动脉的狭窄程度差异。研究对象1.冠心病组2008年12月～2009年10月,阜外心血管病医院住院的冠心病患者175例。2.对照组2008年12月～2009年10月到阜外心血管病医院就诊的心血管病患者121例,其中36例冠脉造影结果未见异常,其余85例患者无冠心病症状并经各项临床检查排除冠心病的诊断。3.糖尿病合并冠心病的组2008年12月～2010年10月入选48例明确诊断为糖尿病,同时在阜外心血管病医院行冠脉造影至少有一支冠状动脉狭窄超过50%以上的冠心病患者。研究方法1.标本采集（1）用于血生化检测：于患者晨起空腹时,肘正中静脉采血4ml,不抗凝。（2）用于血浆Hp水平检测及电泳蛋白分型：于患者晨起空腹时,肘正中静脉采血4ml,EDTA抗凝。置于离心机内以3000rmp/min离心10分钟,收集上清液,置于-70℃冰箱保存备用。2.结合珠蛋白电泳分型采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,分离出Hp-Hb复合物（此复合物具有过氧化物酶的作用）,再利用四甲基联苯胺显色的原理来判断结合珠蛋白基因型。3.血清结合珠蛋白的测定采用美国贝克曼公司的IMMAGE（?）双光路免疫浊度分析仪测定血清结合珠蛋白。4.冠状动脉病变狭窄程度的判定并根据积分进行分组采用Gensini冠状动脉评分系统对冠状动脉的狭窄程度进行评价。（?） Gensini积分=各支冠状动脉病变积分之和。每支冠状动脉病变积分=狭窄程度×病变的位置积分系数。根据冠脉造影结果的Gensini积分,将冠心病组分为3个亚组,分组标准为：亚组1：积分<50；亚组2：积分≥50<90组；亚组3：积分≥90组。研究结果1.冠心病组与对照组血脂、Hp. Hs-CRP的差异（1）两组间Hp、Hs-CRP水平的差异与对照组相比,冠心病组血浆中Hp、hs-CRP水平显著升高,两组间比较有显著统计学差异（P<0.01）。（2）两组间血脂水平的差异两组血浆TC. TG、LDL-C水平无统计学差异。而冠心病组血浆脂蛋白a（Lpa）明显升高,HDL-C明显偏低,与对照组相比均有显著统计学差异（P<0.01）。（3）冠心病组不同亚组间的差异积分≥50<90组血浆hs-CRP、Hp水平比另外两个亚组高,但三个亚组间的血脂、Hp、hs-CRP水平无统计学差异（P>0.05）。2.Hp基因型与冠心病病变程度的相关性（1） Hp基因频率的差异对照组、冠心病组、合并冠心病的糖尿病组,其中Hp2-2基因型的出现频率分别为51.81%（43／85例）、63.11%（65／103例）、56.25%（27／48例）,三组间基因型分布频率无统计学意义（P>0.387）。（2）不同基因型冠状动脉狭窄严重程度的差异冠心病组中,Hp1-1／1-2与Hp2-2两个亚组反映冠脉狭窄程度的Genisi积分分别为51.79±32.35和68.14±43.34,组间比较有统计学差异（P<0.05）。合并冠心病的糖尿病组,Hp1-1／1-2与Hp2-2两个亚组反映冠脉狭窄程度的Gensini积分分别为59.95±44.00、91.56±54.55,组间比较有统计学差异（P<0.05）。研究结论1.本研究结果显示,冠心病患者血浆中Hp、hs-CRP水平明显升高,提示Hp、hs-CRP与冠心病的发生有关,但本研究未发现冠状动脉狭窄的严重程度与Hp、hs-CRP水平相关。2.本研究结果显示,冠心病人群中结合珠蛋白基因型分布频率与无冠心病人群无显著差异,但是在冠心病组、特别是合并冠心病的糖尿病组,结合珠蛋白的Hp2-2基因型与冠心病冠状动脉狭窄程度相关。

论文目录

缩略语表

主要实验仪器

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分结合珠蛋白血浆水平与冠心病相关性

研究目的

研究方法

研究结果

讨论

第二部分结合珠蛋白基因型与冠心病的相关性