论文摘要
目的:信号转导与转录激活因子STAT5 是在细胞因子的信号传导中起关键作用的一种蛋白质,与乳腺癌的发生和发展密切相关。然而,STAT5 在乳腺癌发生、发展中的作用机理尚未明确。本研究从转染STAT5 基因的Sf21 细胞中提取、纯化了STAT5 蛋白,常规免疫家兔制备抗STAT5 抗体。应用抗STAT5 抗体采用免疫组化法和免疫印迹法检测正常乳腺组织和乳腺癌组织中STAT5 蛋白的定位和表达;应用RT-PCR方法测定STAT5 基因表达的差异;研究蛋白酪氨酸激酶JAK抑制剂I 对人乳腺癌细胞STAT5 蛋白表达的影响,以探讨STAT5 在乳腺癌发生、发展中的作用及其机理,为乳腺癌的早期诊断、制定合理经济的治疗方案及预后评价提供新的理论依据。方法:1. STAT5 蛋白的提取和纯化:将STAT5 基因转染Sf21 细胞,于28℃培养48h,收集细胞置于冰上,用超声波降解器和蛋白提取液裂解细胞并提取细胞中的总蛋白,分别用高效Q 凝胶柱、Heparin-Toyopearl 和Superdex G200 层析柱分离、纯化STAT5 蛋白。STAT5 蛋白的纯度用SDS-PAGE和免疫印迹实验鉴定。2. 兔抗STAT5 抗体的制备:应用重组小鼠STAT5 蛋白,常规免疫雄性家兔,制备兔抗STAT5 血清,经饱和硫酸铵盐析、膜透析和DEAE-52离子交换层析柱分离、纯化兔抗STAT5
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