前脑啡肽原基因在NIH3T3细胞的表达

论文摘要

目前,传统的镇痛药尚不能有效治疗慢性疼痛及癌痛。脑啡肽作为一种镇痛药受到关注,许多动物实验已取得成功。利用逆转录病毒载体,经过包装细胞系的包装,可将前脑啡肽原基因整合到靶细胞基因组中,以达到长期镇痛效果。本实验采用pLNCX2载体,其含有包装信号ψ序列,但没有gag、pol和env等编码病毒结构蛋白的基因,须通过包装细胞系（PT67等）的包装。因此,当转染细胞增殖传代时,其形成复制完整病毒能力的的机会极少。其包装产生的逆转录病毒,进一步转染NIH3T3细胞,达到前脑啡肽原基因的长期稳定表达。 目的 1.探讨利用RT-PCR能否获得前脑啡肽原基因; 2.探讨能否筛选出高滴度的产病毒细胞克隆; 3.探讨前脑啡肽原基因是否能够长期稳定表达,满足镇痛需要。 方法 1.RT-PCR 根据GenBank报道的大鼠前脑啡肽原基因序列（NM 017139）,设计引物,其引物5′与3′端分别加上HindⅢ和ClaⅠ酶切位点,以便整和入逆转录病毒载体。提取大鼠脑组织总RNA。反转录得到大鼠脑啡肽基因的单链cDNA,PCR扩增反转录产物。 2.PCR产物测序 琼脂糖电泳,回收目的条带,同T载体连接。转化大肠杆菌JM109,

论文目录

• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 转阿片肽基因镇痛的研究进展
• 参考文献
• 缩略语表
• 致谢