首页> 正文

细胞因子对治疗性乙肝疫苗DNA prime/MVA boost免疫策略的增强作用

2020-11-23阅读(918)

细胞因子对治疗性乙肝疫苗DNA prime/MVA boost免疫策略的增强作用

论文摘要

慢性乙型肝炎是严重威胁人类健康的疾病之一，它是由乙型肝炎病毒的感染引起的。患者体内针对病毒的特异性细胞免疫功能低下，无法及时、彻底清除病毒，由机体产生的非特异性免疫反应造成了肝组织的慢性病理损伤。所以能够引起强烈细胞免疫应答的“prime-boost”免疫策略成为乙型肝炎免疫治疗的有力策略。我们构建了表达病毒表面抗原的DNA疫苗和重组痘病毒（MVA）载体疫苗，采取“prime-boost”免疫方案免疫小鼠。因为DNA疫苗的免疫原性较弱，所以利用细胞因子作为佐剂来增强疫苗的免疫原性。同时在乙肝转基因小鼠上考察此种免疫方案的治疗作用。 本论文共选择IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、GM-CSF和IFN-γ六种鼠源细胞因子佐剂。论文第一部分实验以普通小鼠为动物模型，用细胞因子与HBV DNA疫苗同时免疫小鼠，然后以重组痘病毒疫苗加强免疫，检测不同细胞因子或其组合对HBV DNA疫苗的免疫加强作用。结果表明：1 在增强疫苗体液免疫和细胞免疫反应方面，IL-2质粒要强于IL-2蛋白，所以要选择质粒形式的细胞因子作为佐剂。2 在增强疫苗细胞免疫反应方面，IL-12、IFN-γ和IL-2要强于其它细胞因子，而GM-CSF和IL-2在增强体液免疫反应方面要更有优势。3 GM-CSF和IL-2两种细胞因子联合应用具有协同作用，在增强疫苗的体液和细胞免疫反应方面比单独应用有优势。论文第二部分实验以乙肝转基因小鼠为动物模型，考察所构建疫苗的免疫治疗作用。检测疫苗免疫前后转基因小鼠的体液和细胞免疫反应以及其它生理、生化指标。结果表明“prime-boost”免疫策略可以打破部分转基因小鼠对病毒的免疫耐受，HBV病毒定量和抗原转阴、抗体产生、同时造成一定程度的病理损伤，而DNA疫苗单独免疫则没有治疗作用。

论文目录

  • 第一章 前言
  • 一 乙型肝炎病毒概述
  • 1 乙型肝炎的流行病学和临床症状
  • 2 乙型肝炎病毒的分子生物学
  • 3 乙型肝炎病毒感染和致病机理
  • 二 治疗性HBV疫苗的研究现状
  • 1 治疗性HBV DNA疫苗的历史
  • 2 重组MVA病毒疫苗的研究进展
  • 3 “prime-boost”免疫策略的优势
  • 三 细胞因子佐剂的研究进展
  • 1 细胞因子概述
  • 2 细胞因子在疫苗中的应用
  • 3 细胞因子的佐剂效应
  • 4 小结
  • 四 本论文的设计思想
  • 第二章 实验材料和方法
  • 一 材料、仪器和溶液
  • 1 材料
  • 2 仪器
  • 3 溶液
  • 二 治疗性HBV DNA疫苗的构建及研究
  • 1 治疗性HBV DNA疫苗的构建
  • 2 治疗性HBV DNA疫苗在真核细胞中的表达分析
  • 3 质粒的大规模提取
  • 三 重组痘病毒疫苗的构建与研究
  • 1 重组痘病毒疫苗的构建
  • 2 重组痘病毒疫苗的鉴定
  • 3 重组痘病毒疫苗的扩增和纯化
  • 4 重组痘病毒滴度测定
  • 四 DNA-prime／MVA-boost混合免疫与单独免疫的比较
  • 1 动物试验设计
  • 2 抗体水平检测
  • 3 CTL实验
  • 4 ELISPOT实验
  • 五 细胞因子对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
  • 1 比较IL-2蛋白和质粒对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
  • 2 比较不同细胞因子对治疗性HBV疫苗的增强作用
  • 3 GM-CSF和IL-2联合应用对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
  • 六 治疗性HBV疫苗对转基因小鼠的治疗作用
  • 1 动物实验设计
  • 2 表面抗原水平检测
  • 3 表面抗体水平的检测
  • 4 HBV病毒定量
  • 5 CTL实验
  • 6 转氨酶检测
  • 7 病理切片
  • 第三章 结果与讨论
  • 一 治疗性HBV DNA疫苗的构建
  • 1 获得表面抗原基因
  • 2 表面抗原基因连接到pGEM-T easy载体上
  • 3 表面抗原基因连接到真核表达载体VR1012上
  • 4 治疗性HBV DNA疫苗pVR1012／HBs表达蛋白的鉴定
  • 5 质粒的大规模提取
  • 6 小结
  • 二 重组痘病毒疫苗的构建、表达及鉴定
  • 1 MVA病毒重组穿梭质粒的构建
  • 2 重组痘病毒的筛选
  • 3 重组病毒的PCR鉴定
  • 4 重组病毒表面抗原的表达
  • 5 病毒滴度测定
  • 6 小结
  • 三 DNA-prime／MVA-boost混合免疫与单独免疫的比较
  • 1 MVA boost对DNA疫苗体液免疫的影响
  • 2 MVA boost对DNA疫苗CTL实验的影响
  • 3 MVA boost对DNA疫苗ELISPOT实验的影响
  • 4 小结
  • 四 细胞因子对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
  • 1 IL-2蛋白和质粒对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
  • 2 不同细胞因子对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
  • 3 联合GM-CSF和IL-2对治疗性HBV疫苗免疫应答的影响
  • 4 小结
  • 五 治疗性HBV疫苗对转基因小鼠的治疗作用
  • 1 转基因小鼠血清中表面抗原浓度的检测
  • 2 转基因小鼠血清中表面抗体浓度的检测
  • 3 转基因小鼠血清中HBV DNA病毒滴度的检测
  • 4 转基因小鼠肝功能指标—谷丙转氨酶检测
  • 5 转基因小鼠的肝脏病理切片
  • 6 CTL实验检测结果
  • 7 小结
  • 参考文献
  • 致谢
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 作者简历

    • 相关论文文献

    • [1].基于科学思维的“DNA是主要的遗传物质”教学设计[J]. 教育观察 2019(30)
    • [2].基于粪便DNA的贺兰山岩羊亲权鉴定和婚配制研究[J]. 生态学报 2019(22)
    • [3].通过调节蛋白酶K消化时长优化DNA提取方法[J]. 生物化工 2019(06)
    • [4].蛹虫草线粒体DNA与细胞核DNA进化关系的比较[J]. 微生物学报 2019(12)
    • [5].有毒有机物影响DNA酶解和抗生素抗性基因横向迁移[J]. 农业环境科学学报 2020(01)
    • [6].蓝莓栽培品种的DNA条形码[J]. 林业科学 2019(12)
    • [7].应用于多个沉香属物种鉴定的DNA条形码序列筛选[J]. 中国药学杂志 2019(23)
    • [8].抗核抗体和抗双链DNA检测在系统性红斑狼疮诊断中的意义[J]. 中国医疗器械信息 2019(23)
    • [9].幽门螺旋杆菌诱导的胃腺癌DNA甲基化基因修饰研究进展[J]. 中国老年保健医学 2019(06)
    • [10].DNA分析技术在法医物证鉴定中的应用[J]. 法制博览 2020(03)
    • [11].磁性纳米颗粒负载质粒DNA的研究[J]. 华南农业大学学报 2020(01)
    • [12].DNA智慧扶贫工作室教育扶贫策略与实践[J]. 科技风 2020(06)
    • [13].家畜冷冻精液DNA的纯化及影响因素分析[J]. 南京农业大学学报 2020(02)
    • [14].蝙蝠蛾拟青霉及金水宝胶囊的DNA条形码鉴定[J]. 中国实验方剂学杂志 2020(08)
    • [15].3种DNA分子标记法联合鉴别草珊瑚及其混伪品[J]. 中草药 2020(03)
    • [16].探讨无创DNA检测和羊水细胞染色体检查的意义[J]. 中国卫生标准管理 2020(03)
    • [17].乳头状甲状腺癌中线粒体DNA突变的研究[J]. 中国细胞生物学学报 2020(01)
    • [18].非标记表面增强拉曼光谱在DNA检测中的应用[J]. 激光生物学报 2020(01)
    • [19].彗星电泳检测草胺磷对蚯蚓体腔细胞DNA的损伤[J]. 广东农业科学 2020(01)
    • [20].基于DNA检测的肉制品鉴伪技术研究进展[J]. 食品工业科技 2020(08)
    • [21].绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的比较研究[J]. 畜牧与兽医 2020(03)
    • [22].环境DNA在水体中存留时间的检测研究——以中国对虾为例[J]. 渔业科学进展 2020(01)
    • [23].云斑白条天牛成虫不同组织部位DNA提取方法比较[J]. 滨州学院学报 2019(06)
    • [24].三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察[J]. 中草药 2020(07)
    • [25].DNA倍体分析系统在脱落细胞学及术中病理诊断中的应用[J]. 中国农村卫生 2020(03)
    • [26].DNA免疫吸附治疗重度活动性系统性红斑狼疮的疗效观察[J]. 中国社区医师 2020(07)
    • [27].红肉猕猴桃再生体系的建立及DNA条形码鉴定[J]. 植物生理学报 2020(03)
    • [28].蛋白质精氨酸甲基转移酶1调控DNA损伤修复和细胞凋亡[J]. 海洋科学 2020(03)
    • [29].基于密度梯度离心技术分离稳定同位素DNA的方法研究[J]. 实验科学与技术 2020(02)
    • [30].基于DNA链置换的可满足性问题的计算模型[J]. 阜阳师范学院学报(自然科学版) 2020(01)

    标签：;  ;  ;  ;  

    细胞因子对治疗性乙肝疫苗DNA prime/MVA boost免疫策略的增强作用
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2025 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5