LPSp辅佐HBsAg诱导机体产生特异性抗体的机制研究

LPSp辅佐HBsAg诱导机体产生特异性抗体的机制研究

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目的: 研究革兰氏阴性非致病菌成团泛菌脂多糖(Pantoea agglomeranslipopolysaccharide,LPSp)作为佐剂促进乙型肝炎表面抗原蛋白(HBsAg)诱导小鼠产生抗-HBs抗体的作用机制。方法: 分离BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,经纯化、鉴定、计数,调整细胞浓度为1×106/ml,在体外分别给予HBsAg加LPSp、HBsAg、LPSp、生理盐水预刺激,体外培养后消化回收各实验组巨噬细胞,进行以下实验(1)将培养48h后的各实验组巨噬细胞按分组经尾静脉注射免疫同系BALB/c小鼠,5天后给予HBsAg 再次免疫,收集初次免疫后15、20、25天的血清,用ELISA法检测乙型肝炎表面抗体(抗-HBsAb)的滴度。(2)观察体外刺激6h后的各实验组巨噬细胞的吞噬功能变化。(3)收集体外刺激48h后的各实验组的巨噬细胞,离心,回收培养上清,检测TNF-α活性和NO浓度。(4)将体外刺激48h后的各实验组的的巨噬细胞按分组经足垫皮下注射免疫同系BALB/c小鼠,5天后收集小鼠腹股沟回流淋巴结,制成细胞悬液,在体外与HBsAg共同培养,用ELISA法检测淋巴细胞培养上清中的IL-4和IFN-γ的含量。结果:(1)LPSp能有效促进HBsAg预致敏的巨噬细胞诱导小鼠抗-HBs抗体产生,其效价在免疫后15d、20d、25d时均较单纯HBsAg致敏组显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),而且其抗体效价在免疫15天时已达峰值,在免疫20~25天时下降到一个相对稳定的水平。单纯HBsAg致敏组的抗体效价出现较迟,在免疫后20d时才达高峰。(2)LPSp能刺激巨噬细胞的吞噬功能,单纯LPSp组巨噬细胞吞噬率较NS对照组和单纯HBsAg组的显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),与HBsAg加LPSp组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(3)LPSp能刺激体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞释放TNF-α和NO,有LPSp刺激的条件下,

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