绢丝昆虫柞蚕卵黄原基因（Vg）5’端的克隆及序列分析

论文摘要

本论文主要是对柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区DNA的克隆和序列分析。柞蚕（Antheraea pernyi）是属于鳞翅目（Lepidoptera）大蚕蛾科（Saturniidae）的一种野生绢丝昆虫,本文根据已解析的天蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区DNA序列利用昆虫卵黄原蛋白进化上的保守性,设计特异性的引物从柞蚕基因组DNA中扩增出约500bp的柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区DNA片段,经克隆、测序和分析后获得柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区序列,所解析柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区序列已登录GeneBank,登录号为EU330205。柞蚕卵黄原基因的转录启始位点位于启始密码子（ATG）上游55bp处。TATA框位于转录启始位点上游约30bp,位于启始密码子（ATG）上游-79～-86bp处,性别决定位点（BmDSX）位于启始密码子上游-156～-163bp处。此外,一些昆虫基因表达调控有关的元件如CREB,GATA,and CdxA等存在于柞蚕卵黄原蛋白基因5’端序列中。说明这些与基因表达调控有关的元件由于它们在基因表达调控中发挥重要作用,而被作为功能基因特异性的保留下列。目前国内外解析出的昆虫卵黄原蛋白基因5’端调控区序列还比较少,就蚕而言,已解析出卵黄原蛋白基因5’端调控区序列的除柞蚕外仅家蚕和天蚕两种。我们将所解析的柞蚕卵黄原蛋白基因5’端调控区序列与家蚕和天蚕的进行对比发现柞蚕同家蚕的卵黄原蛋白基因5’调控区序列有着相当大的差异,在基因的同源性关系上远不如柞蚕与天蚕的同源性高,这是同我们已知的三种蚕亲缘关系远近是相符的。这样从另一方面证明了柞蚕,天蚕与家蚕三者之间的进化关系。柞蚕卵黄原基因5’调控区作为其卵黄原基因表达的重要调控部位其基因序列的解析对研究该序列在基因表达调控中的作用有着重要的意义,也为研究该序列中所含有的基因表达调控元件如TATA box,CdxA,GATA-X以及CRER等在基因表达调控中的作用提供了理论依据,并为BmDSX基因在昆虫性别决定中起调控作用提供了证据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 文献综述
• 1.1 昆虫卵黄原蛋白概述
• 1.1.1 昆虫Vg的发现、分离鉴定及其性质
• 1.2 卵黄原蛋白的研究进展
• 1.2.1 昆虫卵黄原蛋白（Vg）的性质和结构
• 1.2.2 昆虫卵黄原蛋白的合成及影响因子
• 1.2.3 卵母细胞对Vg的摄取及Vtn在胚胎发育中的去向
• 1.2.4 昆虫卵黄原蛋白（Vg）基因结构
• 1.2.5 卵黄原基因5'调控区的研究进展
• 1.3 柞蚕卵黄原基因（Vg）5'调控区的研究意义
• 1.4 卵黄原蛋白研究的基本技术路线
• 2 材料和方法
• 2.1 柞蚕卵黄原基因（Vg）5'端的克隆及序列分析
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 主要的仪器设备
• 2.1.3 主要生化试剂及常用溶液的配制
• 2.1.4 柞蚕脂肪体的提取
• 2.1.5 脂肪体总DNA的抽提
• 2.1.6 总DNA的检测
• 2.1.7 PCR反应的成分及程序
• 2.1.8 PCR产物的纯化
• 2.1.9 感受态细胞的制备
• 2.1.10 连接和转化
• 2.1.11 质粒DNA的制备
• 2.1.12 重组质粒的检测
• 2.1.13 测序
• 2.1.14 序列拼接与分析
• 2.2 柞蚕卵黄原基因5'调控区调控功能的研究方法
• 2.2.1 供试材料
• 2.2.2 柞蚕卵黄原基因5'调控区部分序列DNA片段的PCR扩增
• 2.2.3 含荧光蛋白（GFP）基因质粒菌株的接种与保种
• 2.2.4 荧光蛋白基因的检测
• 3 结果与分析
• 3.1 柞蚕卵黄原基因（Vg）5'端的克隆及序列分析结果
• 3.1.1 脂肪体总DNA的抽提
• 3.1.2 PCR扩增的结果
• 3.1.3 柞蚕卵黄原蛋白基因5'调控区的DNA序列测定及分析
• 3.1.4 柞蚕与天蚕卵黄原蛋白基因5'调控区DNA序列对比分析
• 3.1.5 柞蚕与家蚕卵黄原蛋白基因5'调控区DNA序列对比分析
• 3.2 含柞蚕卵黄原基因5'调控区调控序列的报告基因构建
• 3.2.1 柞蚕卵黄原基因5'调控区部分序列DNA片段的PCR扩增
• 3.2.2 荧光蛋白基因的检测
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 个人简介