19种抗禽类IgY多克隆抗体的制备和标记

论文摘要

动物是一个巨大的病原库,也是新发传病的主要来源。病原携带动物的检测技术和新发传染病的溯源检测技术主要有PCR技术、DNA芯片技术和血清学技术等。PCR技术和DNA芯片技术具有灵敏度高、特异性强的优点,但是只能检测到正在感染的组织,不能检测到发生过感染后痊愈的动物。血清学检测技术对正在感染的动物和感染后痊愈的动物都可适用,是不可替代的病原检测和溯源的检测技术之一。但是目前世界上抗动物抗体的二级抗体只有很少的几种,不能覆盖和人类接近的所有动物的检测需要。本课题的主要目标是纯化与人类关系密切的禽类一级抗体作为抗原,制备HRP-标记的抗多种禽类IgY的二级抗体,建立多种动物血清学检测体系。以解决动物病原血清学检测体系不完备的问题。本课题采集了19种与人类关系密切的禽类蛋或血清,用水稀释法,HiTrap IgY Purification HP免疫亲和层析法,PEG沉淀,阴离子交换层析,硫酸铵分级沉淀法等纯化了不同鸟类的IgY,并用纯化的IgY作为抗原制备抗血清。Protein-A亲和纯化兔抗IgY血清IgG。使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,westernblotting检测酶标抗体的特异性。本课题共纯化了鸡、鹅、鸵鸟、孔雀、鹌鹑、鸬鹚、大雁、富贵鸟、贵妇鸡、燕鸥、赤嘴潜鸭、翘鼻麻鸭、鸽子、小鸊鹈、鹦鹉、长脚鹬、麻雀、草鹭、夜鹭等共19种鸟类的IgY。制备了19种相应的兔抗禽类卵黄抗体IgY的二级抗体;并对其中的17种进行了辣根过氧化物酶标记,为鸟类的血清学检测体系建立了初步资源。

论文目录

• 缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 一、材料与方法
• （一） 材料
• （二） 方法
• 二、实验结果
• （一） 卵黄抗体IgY的纯化结果
• （二） 抗血清的纯化及标记结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢