论文摘要
目的聚肌苷酸（聚）胞苷酸（简称聚肌胞,polyinosinic-polycytidylic acid,poly i:c）是一种人工合成的双链RNA（double-strand RNA,dsRNA）模拟物。本研究利用肺癌细胞系来探讨poly i:c诱导肺癌细胞凋亡的分子机制。方法将poly i:c转入肺腺癌细胞株A549细胞及小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞中,MTT法检测poly i:c对肺癌细胞生长抑制作用。AnnexinV FITC/PI双染检测poly i:c对A549及NCI-H446细胞的凋亡诱导作用。ReaI-time PCR方法检测poly i:c对肺癌细胞中受体TLR3,MDA-5及RIG-I mRNA表达的影响,并检测poly i:c对IFN-βmRNA表达的影响。蛋白免疫印迹法检测poly i:c作用于A549细胞后凋亡蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax的变化,并检测磷酸化JNK和ERK MAPK蛋白的表达。结果MTT结果提示：poly i:c胞内作用明显抑制肺癌细胞A549和NCI-H446的生长,这种抑制作用具有剂量及时间依赖性。AnnexinV FITC/PI双染结果提示：与对照组（PBS组,poly i:c单独作用组,转染试剂Hipo单独作用组）比较,poly i:c胞内作用可显著地诱导A549和NCI-H446细胞凋亡（p<0.05）。Real-time PCR结果提示：poly i:c胞内作用6h可明显上调A549和NCI-H446细胞的TLR3、RLG-I. MDA-5及IFN-βmRNA的表达,与对照组比较均有显著性统计学意义（p<0.01）。蛋白免疫印迹法结果发现：在A549细胞中,polyi:c胞内刺激可以激活Caspase-3和JNK MAPK通路,同时抑制ERK MAPK通路。结论poly i:c胞内作用可以明显抑制肺癌细胞的生长并诱导肺癌细胞凋亡。poly i:c胞内作用可上调肺癌细胞中TLR3, RIG-I,MDA-5受体及IFN-βmRNA表达。poly i:c胞内作用引起Caspase-3凋亡通路活化,激活JNK通路，抑制ERK通路。poly i:c不仅是重要的免疫调节剂,还可直接诱导肺癌细胞凋亡