两种木贼提取物对动脉粥样硬化早期大鼠血管平滑肌细胞的影响

论文摘要

目的:前期实验研究证实中药木贼水煎剂具有调节脂代谢紊乱,保护血管内皮,改善动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）早期病变的作用。本实验在前期实验的基础上,对木贼抗AS的有效部位进行提取,通过动物实验,研究两种提取物对AS早期大鼠血脂、主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell, VSMC）增殖、凋亡、凋亡相关基因的蛋白表达及血管壁形态学的影响。旨在探讨木贼抗AS的有效部位及其作用机制。方法1木贼有效部位的提取、分离中药木贼用蒸馏水1:100,加热3小时,回流提取得木贼水煎剂,水煎剂用正丁醇萃取,正丁醇萃取液加热回收至干,用蒸馏水定容至1.25g/ml生药备用。萃取后剩余部分浓缩至浓度为1.25g/ml生药备用。2动物实验选用健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠,实验鼠50只,备用鼠10只,共60只。随机分为5组:正常对照组、病理模型组、阳性对照组、木贼提取物Ⅰ组和木贼提取物Ⅱ组,每组10只。实验第1周起,除正常对照组大鼠给予基础饲料喂养,其余4组分别给予高脂饲料喂养（87.48%基础饲料+10%猪油+2%胆固醇+0.5%胆盐+0.02%他巴唑）,各组动物自由饮水。造模同时,阳性对照组用0.16g/（kg·d）吉非罗齐溶液灌胃;木贼提取物Ⅰ组以木贼的正丁醇提取物10ml/（kg·d）（合生药12.5g/kg·d）灌胃;木贼提取物Ⅱ组以提取剩余物10ml/（kg·d）（合生药12.5g/kg·d）灌胃;正常对照组及病理模型组分别给予等量自来水灌胃,随体重增长调节药量,共9周。除实验组大鼠外,每组各增加2只备用鼠,同样方法复制模型,给药,作为实验中大鼠中途死亡的补救。3指标检测9周末眶后取血,全自动生化分析仪检测血脂水平;流式细胞术检测VSMC增殖周期、增殖指数、凋亡相关基因的蛋白表达、凋亡率;取主动脉分别以光镜及电镜观察血管壁变化。结果1实验大鼠一般状况正常组大鼠毛色光泽,活动饮食正常;病理模型组大鼠随实验进程,毛发色泽暗淡,活动减少,精神萎靡,易激惹,后期进食量减少;阳性对照组、木贼提取物Ⅰ组和木贼提取物Ⅱ组大鼠一般情况好于模型组。2血脂的变化病理模型组胆固醇（total cholesterol, TC）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein, LDL）较正常组明显升高（P<0.01）,甘油三酯（triglyceride, TG）、极低密度脂蛋白（very low density lipoprotein, VLDL）轻度升高,但无统计学意义;木贼提取物Ⅰ组TG、VLDL较病理模型组明显下降（P<0.01）;木贼提取物Ⅱ组TG显著下降（P<0.01）,VLDL减少（P<0.05）,高密度脂蛋白（high density lipoprotein, HDL）上升（P<0.01）。3 VSMC增殖周期、增殖指数的变化模型组处于G0/G1期的VSMC百分比较正常组明显减少,S期和G2M期的细胞增多（P<0.01）;木贼提取物Ⅰ组、Ⅱ组的G0/G1期细胞较模型组显著升高（P<0.01）,S期细胞百分比则明显降低（P<0.01）,G2M期细胞百分比亦有不同程度降低;模型组VSMC增殖指数较正常组增高（P<0.01）;木贼提取物Ⅰ组和木贼提取物Ⅱ组增殖指数较模型组显著下降（P<0.01）。4 VSMC凋亡相关基因的蛋白表达、凋亡率的变化病理模型组VSMC的Fas蛋白表达轻度升高,但无统计学意义,突变型p 53、Caspase-3较正常组表达升高（P<0.01）,Bcl-2下降（P<0.01）,凋亡率增高（P<0.01）;木贼提取物Ⅰ组和木贼提取物Ⅱ组Fas蛋白表达明显高于病理模型组（P<0.01）;突变型p 53蛋白减少（P<0.01）,其中木贼提取物Ⅰ组较木贼提取物Ⅱ组下降明显（P<0.01）;Bcl-2蛋白减少（P<0.01）;Caspase-3蛋白升高（P<0.01）;木贼提取物Ⅰ组和木贼提取物Ⅱ组VSMC的凋亡率较模型组显著升高（P<0.01）;木贼提取物Ⅰ组较木贼提取物Ⅱ组凋亡率增加更为明显（P<0.01）。5主动脉形态学改变5.1肉眼观察正常组大鼠血管内膜光滑,管壁有弹性;病理模型组大鼠血管内膜面光泽度下降,管壁弹性稍差;阳性对照组及两种木贼提取物组大鼠与正常组相近。5.2光镜观察正常组血管内膜光滑,完整,中膜VSMC走行规律,未见增生。病理模型组血管内膜严重损伤,内膜层可见大量VSMC,中膜VSMC数目也明显增多,排列紊乱,细胞间基质丰富。木贼提取物Ⅰ组和木贼提取物Ⅱ组血管内皮局部损伤,中膜VSMC可见少量迁徙增生,但较病理模型组明显减轻,且木贼提取物Ⅰ组优于木贼提取物Ⅱ组。5.3透射电镜观察正常组主动脉VSMC外形正常,细胞核呈轻度扭曲状,核仁较大,肌丝丰富;病理模型组VSMC高度变形,核分裂,核仁肥大。细胞器增多,肌丝减少,胞质中可见吞噬的脂滴,间质纤维增生;两组提取物与病理模型组相比,VSMC变形程度明显变小,胞体及胞核体积减小,细胞器减少,胞质中未见异常物质。结论:两种木贼提取物均有降低血脂,调节脂代谢紊乱,抑制VSMC转型及分裂增殖,调控VSMC凋亡相关基因的蛋白表达,促进异常增生的VSMC凋亡,保护血管壁结构等抗AS的作用。综合各项指标,木贼提取物Ⅰ组优于木贼提取物Ⅱ组,这为进一步研究木贼抗AS的确切有效成分奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
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• 研究论文两种木贼提取物对动脉粥样硬化早期大鼠血管平滑肌细胞的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 影响动脉粥样硬化平滑肌细胞的中药有效成分研究进展
• 致谢
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