转化生长因子β1诱导BALB/c 3T3成纤维细胞转化及对早期生长反应基因1表达的影响

论文摘要

前言肺纤维化的发病机制复杂，其特征是异常沉积的细胞外基质破坏了正常的肺泡结构。肌成纤维细胞是细胞外基质的重要来源，也是肺纤维化的主要效应细胞，但其起源尚不清楚，大多数研究显示，肺纤维化病灶中的肌成纤维细胞来源于预先存在于支气管周围和血管周围血管外膜的成纤维细胞，研究显示体外培养的成纤维细胞在转化生长因子β（TGF-β）等细胞因子的作用下，可被诱导分化为肌成纤维细胞。早期生长反应基因1（early growth response gene-1，Egr-1）是一个与增长、分化和凋亡有关的锌指转录因子，近年来研究显示Egr-1与肺纤维化的发病有关。Chun Geun Lee等将TGF-β1基因导入小鼠体内，产生了明显的肺泡上皮细胞凋亡，随后发生了以单核细胞增多为主的炎症、组织纤维化、肌成纤维细胞增生、肺泡间隔破裂和蜂窝肺改变，而敲除Egr-1基因后，上述改变显著减轻，此研究提示Egr-1可能介导了TGF-β1诱导的肺泡结构细胞凋亡和肺纤维化，但Egr-1是否直接参与成纤维细胞向肌成纤维细胞转化目前尚未见报道。本研究以BALB／c 3T3成纤维细胞株为靶细胞，探讨了TGF-β1诱导其向肌成纤维细胞转化过程中Egr-1表达的变化，为进一步针对Egr-1进行干预研究奠定了基础。实验材料与方法1、材料（1） BALB／c 3T3成纤维细胞株（2）人重组转化生长因子β1（3）α平滑肌肌动蛋白抗体（4） Egr-1抗体（5）辣根过氧化物酶标记二抗（6）羊抗小鼠荧光素异氰酸酯标记抗体（7）胎牛血清（8）DMEM培养基2、方法（1）细胞培养（2）流式细胞仪分析（3）免疫细胞化学分析（4）Western免疫印记分析实验结果1、α-SMA阳性细胞百分率的变化实验组培养24 hα-SMA阳性细胞百分率（6.65±0.48）％与对照组（5.53±0.62）的差异无统计学意义（P＞0.05），继续培养至48 h后，实验组（28.38±3.60）％与对照组（9.49±0.21）％比较，差异有统计学意义（P＜0.05），培养至72 h后，实验组（36.04±0.73）％与对照组（15.23±0.33）％比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。2、免疫细胞化学检测细胞内Egr-1表达水平实验组孵育60 min时细胞内Egr-1表达增加，孵育90 min时Egr-1表达明显增加，而对照组阳性染色细胞较少。3、Western blot免疫印迹法检测细胞内Egr-1水平对照组灰度值为（37.66±18.00），而实验组孵育15min的灰度值为（55.30±26.03），与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），随着孵育时间延长，实验组灰度值逐渐增加，60 min时为（114.68±14.38），90 min时为（128.68±22.08），与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01），随后灰度值逐渐降低，240 min时为（38.99±6.80）与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。讨论TGF-β1是具有调节细胞增殖、生长、分化和迁移的多功能的细胞因子，体内实验表明应用TGF-β1干预导致了表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的肌成纤维细胞聚集形成了肉芽组织，而且TGF-β1能诱导体外培养的皮肤成纤维细胞表达α-SMA，显示在纤维化形成和皮肤伤口愈合过程中TGF-β1对肌成纤维细胞分化起作用，我们的研究也证明，TGF-β1能诱导BALB／c 3T3成纤维细胞向肌成纤维细胞分化。Egr-1是锌指转录因子家族中即刻早期基因编码的产物，有cys2-his2锌指结构。Egr-1是组织炎症和重塑的重要中介，最近研究显示Egr-1与肺纤维化有关。我们猜测Egr-1可能是成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中重要中介，为了明确上述观点，我们在TGF-β1诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中应用免疫细胞化学和Western blot免疫印记方法探讨了Egr-1表达。研究显示Egr-1表达高峰在90min，而α-SMA表达于72h明显，说明Egr-1表达先于α-SMA，Egr-1表达增加发生在成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的早期，但Egr-1是否具有直接诱导α-SMA表达的作用还需进一步研究。结论TGF-β1能诱导BALB／c 3T3成纤维细胞向肌成纤维细胞转化，Egr-1表达增加发生在成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的早期，但Egr-1是否能直接诱导α-SMA表达还需进一步研究。

论文目录

• 一、摘要
• 中文论著摘要
• 英文论著摘要
• 二、英文缩略语
• 三、论文
• 前言
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 四、本研究创新性的自我评价
• 五、参考文献
• 六、附录
• 综述
• 在学期间科研成绩
• 致谢
• 个人简介