脂代谢相关三基因突变小鼠模型动脉粥样硬化机理研究—蛋白质组学分析

论文摘要

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是由多种因素和作用环节介导的慢性病理变化过程,其发生发展与多基因异常以及遗传因素与环境因素的相互作用有关。深入研究AS关键基因、AS易感基因等重要遗传因素之间的相互作用机理以及环境因素对AS的影响,有助于进一步阐明AS的发生机制,为AS的预防和治疗提供有益的理论依据与研究平台。 目前对AS发病机制的研究重点已从单基因、单因素向多基因、多因素方向发展。本实验室首次成功建立了三基因突变(apoE+/LDLR+/Leprdb/db小鼠模型,并从遗传因素和环境因素（高脂高胆固醇饮食）入手,对该小鼠的生物学特征、发生AS的病理生理特点以及AS发生机制进行了分子生物学和分子病理学研究。在前期研究结果的基础上,本论文进一步研究了三基因突变时基因与基因以及基因与环境间的相互作用对血脂、血糖及血浆中主要脂蛋白成分含量的变化、脂代谢重要器官肝脏的病理形态学改变的影响,探讨了肝脏中重要差异蛋白表达的变化规律,并且分析了上述变化与AS发生发展的关系,现得出以下结果: 1.血浆TC、TG、LDL—C水平的变化:5w龄普通饮食组ALO小鼠的TC水平为21.26+4.38.mM,略高于其他基因型小鼠;高脂高胆固醇饮食组ALO小鼠的。TC水平为110.51士12.99 mM,显著高于其他基因型小鼠。7w龄起,两种饮食喂养的ALO小鼠的TC水平均显著高于其他基因型小鼠。两种饮食喂养的ALO小鼠各年龄段的TG水平都略高于其他基因突变小鼠。ALO小鼠的LDL-C水平与TC的变化相似,且差异显著性更明显。血浆GLU水平的变化:两种饮食喂养的DB、ALO小鼠与WT小鼠相比有明显增加,A、L、AL小鼠与WT小鼠相比无差异。饮食性因素对小鼠GLU水平的影响不明显。血浆HDL-C水平的变化:普通饮食喂养时,DB、ALO小鼠的HDL-C水平与WT小鼠相比有明显增加,A、L、AL小鼠与WT小鼠相比无差异:高脂高胆固醇饮食喂养时,A、L、AL、DB、ALO小鼠的HDI-C水平都较WT小鼠有明显升高,ALO小鼠升高得尤为明显。 高脂高胆固醇饮食促进了高脂血症和AS的发生。各年龄时期高脂高胆固醇饮食组的ALO小鼠各项血浆生化检测指标均高于普通饮食组。且高脂高胆固醇饮食组的TC、HDL-C、LDL-C水平均在5w龄时达到最高,TG水平保持上升趋势,GLU水平略有升高,但不显著。

论文目录

• 缩写表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述
• 1 蛋白质组学的诞生
• 2 蛋白质组学的分类和内容
• 2.1 结构蛋白质组学
• 2.2 功能蛋白质组学
• 2.3 表达蛋白质组学
• 3 差异表达蛋白质组学
• 3.1 差异表达蛋白质组学的概念
• 3.2 差异表达蛋白质组学研究的意义
• 4 差异表达蛋白质组学的研究技术
• 4.1 双向电泳技术
• 4.2 质谱及相关技术
• 4.3 蛋白质芯片技术
• 4.4 生物信息学
• 5 差异表达蛋白质组学相关技术的局限性及改进策略
• 5.1 蛋白质分离技术
• 5.2 质谱技术
• 5.3 结合其他技术的综合性分析
• 6 差异表达蛋白质组学在心血管疾病中的应用
• 6.1 鉴定心血管疾病生物标记分子及药物靶点
• 6.2 心血管病致病机理研究
• 6.3 心血管研究的蛋白质数据库
• 7 前景与展望
• 参考文献
• 第二章 三基因突变小鼠模型的建立和筛选
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 三基因突变小鼠的建立
• 1.3 小鼠基因型的鉴定
• 2 结果与讨论
• 3 结论
• 第三章 生化检测
• 1 材料与方法
• 1.1 动物模型
• 1.2 试剂仪器
• 1.3 方法
• 2 结果
• 2.1 小鼠血脂、血糖和血浆主要脂蛋白水平的变化情况
• 2.2 高脂高胆固醇饮食对小鼠血脂、血糖和血浆主要脂蛋白水平的影响
• 3 讨论
• 第四章 肝脏病理形态学观察
• 1 材料
• 1.1 动物模型
• 1.2 试剂仪器
• 2 方法
• 2.1 体重测量
• 2.2 肝脏冰冻切片
• 3 结果
• 3.1 小鼠平均体重的变化情况
• 3.2 肝脏切片光学显微镜观察
• 4 讨论
• 4.1 各基因型小鼠在不同饮食条件下体重变化规律的分析
• 4.2 肝脏病理形态学研究
• 第五章 蛋白质组学分析
• 1 材料
• 1.1 动物模型
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 方法
• 2.1 样品制备
• 2.2 Bradford法测定蛋白浓度
• 2.3 双向电泳
• 2.4 银染
• 2.5 图像采集与分析
• 2.6 胶内胰酶消化
• 2.7 LTQ-ESI质谱分析及数据库搜索鉴定蛋白质
• 2.8 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 小鼠肝脏2-DE图谱匹配率及重复性分析
• 3.2 小鼠肝脏2-DE图谱中差异蛋白质点的比较
• 3.3 小鼠肝脏蛋白谱中部分差异蛋白点的LTQ-ESI鉴定
• 3.4 ALO、AL小鼠与WT小鼠肝脏图谱比较的其余部分差异表达蛋白
• 4 讨论
• 结论与展望
• 参考文献
• 硕士期间撰写或发表的主要论文
• 致谢
• 独创性声明