春石斛组培快繁及染色体制片技术的研究

论文摘要

石斛兰是一种观赏价值极高的花卉,与卡特兰,蝴蝶兰,万带兰并列为观赏价值最高的四大观赏兰类。由于石斛兰种子发芽率低,分株繁殖速度慢,影响了规模化生产的进程。本文以春石斛（Dendrobium nobile）丛生试管苗为材料,研究了影响春石斛组培快繁的诸因素,旨在建立其组培高效快繁体系,为春石斛的规模化生产提供理论依据。此外,利用春石斛试管苗根,对染色体制片技术进行了研究,为兰科植物分类和系统进化研究提供参考资料,同时为春石斛的核型研究以及基因组和DNA序列的研究提供一定的前期基础参数。研究培养基成分对春石斛试管苗增殖和生长的影响,MS基本培养基显著优于White、VW、SH、B5、KC培养基;当MS培养基中加入BA3.0 mg·L-1与NAA0.1 mg·L-1时外植体生长良好,增殖的不定芽数最多;30 g·L-1的蔗糖对春石斛增殖生长有促进作用。通过研究MS培养基浓度、生长素IBA浓度、活性炭浓度和不同天然提取物影响春石斛组培生根的外部因子,结果表明:MS培养基浓度对生根的影响较为明显,春石斛幼苗在1/2 MS的培养基中生根效果最佳,生根较长且根数多,生根率达到95.7%;单一使用生长素IBA对春石斛进行生根诱导,以IBA0.5 mg·L-1的处理达到最佳效果;IBA浓度超过0.5 mg·L-1时,对根的生长有抑制作用;活性炭浓度为0.5 g·L-1时最适宜幼苗的生根和生长。培养基中添加100 g·L-1的椰子汁生根壮苗效果最佳,生根率达97.3%。对春石斛染色体制片技术进行优化,结果表明:酸解以60℃1N HCl解离14 min左右效果较好,染色体染色明显,分散良好。常温下用1N HCl解离18-22min也得到了较好的效果;根尖长度以1.0 cm左右时取材较好,能获得较多的细胞分裂相;预处理以8-羟基喹啉、饱和对二氯苯、8-羟基喹啉和饱和对二氯苯的混合液处理的染色体形态比较好、染色体易于辨别,尤其以8-羟基喹啉和饱和对二氯苯的混合液处理的效果最好。经8-羟基喹啉和饱和对二氯苯的混合液处理后染色体具有分散更易于辨认等优点;春石斛的染色体数目为2n=38,染色体长度为1～2.36μm,属于小型染色体。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 一、春石斛的生物学特性
• 二、春石斛的观赏价值及应用
• 三、春石斛的繁殖
• 四、春石斛组织培养研究进展
• 五、染色体的研究意义
• 六、植物染色体制片研究进展
• 七、核型分析
• 八、研究目的和意义
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 外部因子对春石斛组培增殖的影响
• 1.2.1.1 基本培养基种类对春石斛组培增殖的影响
• 1.2.1.2 细胞分裂素BA浓度对春石斛组培增殖的影响
• 1.2.1.3 培养基中蔗糖浓度对春石斛组培增殖的影响
• 1.2.2 外部因子对春石斛组培幼苗生长和生根的影响
• 1.2.2.1 MS培养基浓度对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 1.2.2.2 IBA浓度对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 1.2.2.3 活性炭浓度对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 1.2.2.4 天然提取物对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 1.2.2.5 不同移栽基质对春石斛幼苗生长及移栽成活率的影响
• 1.2.2.6 数据分析
• 1.2.3 春石斛染色体制片
• 1.2.3.1 取材
• 1.2.3.2 预处理
• 1.2.3.3 固定
• 1.2.3.4 酸解
• 1.2.3.5 染色和压片
• 1.2.3.6 染色体数目的研究
• 2 结果与分析
• 2.1 外部因子对春石斛组培增殖的影响
• 2.1.1 基本培养基种类对春石斛增殖的影响
• 2.1.2 BA浓度对春石斛增殖的影响
• 2.1.3 蔗糖浓度对春石斛增殖的影响
• 2.2 外部因子对春石斛组培幼苗生长和生根的影响
• 2.2.1 MS培养基浓度对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 2.2.2 IBA浓度对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 2.2.3 活性炭浓度对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 2.2.4 不同天然提取物对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 2.3 不同移栽基质对春石斛幼苗生长及移栽成活率的影响
• 2.4 实验条件对春石斛染色体制片的影响
• 2.4.1 酸解时间对春石斛染色体制片的影响
• 2.4.2 不同预处理对春石斛根尖细胞分裂相的影响
• 2.4.2.1 秋水仙素处理
• 2.4.2.2 8-羟基喹啉处理
• 2.4.2.3 对二氯苯处理
• 2.4.2.4 对二氯苯和8-羟基喹啉的混合液处理
• 2.4.3 根尖长度对春石斛根尖细胞分裂相的影响
• 2.4.4 春石斛染色体数目
• 3 讨论
• 3.1 基本培养基种类对春石斛增殖的影响
• 3.2 植物生长调节剂浓度对春石斛增殖的影响
• 3.3 蔗糖浓度对春石斛增殖的影响
• 3.4 MS培养基浓度对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 3.5 生长素对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 3.6 活性炭对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 3.7 天然提取物对春石斛幼苗生长和生根的影响
• 3.8 根尖取材对春石斛染色体制片的影响
• 3.9 预处理对春石斛染色体制片的影响
• 3.10 操作技术对染色体制片的影响
• 4 结论
• 致谢
• 参考文献