酸浆属植物中免疫抑制活性物质的筛选及药理学研究

论文摘要

自身免疫性疾病已经成为严重影响人类健康的第三大疾病,积极寻找和开发低毒高效的免疫抑制药物,是世界医药学界的一项重大课题。国内外学者经过大量研究,发现酸浆属植物具有抗癌、抑菌、抗炎和降血糖等多种药效,但对酸浆属植物的免疫抑制作用尚无系统的研究。本课题通过原代培养BALB/c小鼠的脾细胞,建立T淋巴细胞体外异常增殖模型,通过体外免疫抑制活性筛选,筛选出具有T淋巴细胞抑制作用的酸浆属植物单体化合物。本研究运用MTT法,评价单体的细胞毒性；采用[3H]TdR掺入法,研究单体的免疫抑制活性；利用流式细胞术,观察单体对细胞周期和细胞亚型的影响；通过ELISA法,测定单体对Th1/Th2细胞因子平衡的调节；采用Western Blotting及RT-PCR方法,考察单体对血红素加氧酶-1表达的影响;采用二甲苯诱导的耳廓肿胀体内模型,验证单体的体内药效。研究表明,筛选出的低毒高效单体Physalin H,对T淋巴细胞增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性。Physalin H对ConA激活的小鼠T淋巴细胞的EC50为0.69μg/mL,最佳药物作用时间为48h。流式细胞技术结果显示,Physalin H阻遏细胞从G1期到S期的转换,抑制T淋巴细胞分裂,同时提高抑制性T细胞（CD8+）相对数量,从而抑制T淋巴细胞的增殖。为了进一步研究其抑制机理,本课题通过对Th1/Th2细胞因子和HO-1保护性基因进行研究,发现Physalin H通过上调HO-1表达,抑制Thl型细胞因子分泌,促进Th2型细胞因子分泌,进而调整Th1/Th2平衡。体内研究发现Physalin H显著抑制小鼠耳廓肿胀程度和体内炎症细胞因子Interleukin-2和nterleukin-6的分泌。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 自身免疫性疾病
• 1.1.1 常见自身免疫性疾病
• 1.1.2 自身免疫性疾病发病机制
• 1.1.3 自身免疫性疾病治疗
• 1.2 免疫抑制药物研究进展
• 1.2.1 激素类免疫抑制剂
• 1.2.2 DNA或RNA合成抑制剂
• 1.2.3 细胞因子合成抑制剂
• 1.2.4 细胞因子作用抑制剂
• 1.2.5 生物免疫抑制剂
• 1.2.6 天然产物提取物免疫抑制剂
• 1.3 酸浆属植物化学成分及其药理活性研究进展
• 1.3.1 酸浆属植物化学成分研究进展
• 1.3.2 酸浆属植物药理作用研究进展
• 1.4 研究目标内容创新点和意义
• 1.4.1 研究目标
• 1.4.2 研究内容
• 1.4.3 创新点
• 1.4.4 研究意义
• 第2章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物
• 2.1.2 实验药品
• 2.1.3 常用试剂
• 2.1.4 仪器与设备
• 2.1.5 生化试剂配制
• 2.2 常用实验方法
• 2.2.1 小鼠脾淋巴细胞的分离及培养
• 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳
• 2.2.3 Western blotting
• 2.2.4 细胞RNA的抽提
• 2.2.5 RNA的反转录
• 2.2.6 细胞蛋白的提取
• 第3章 酸浆属有效单体成分的筛选研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 实验动物
• 3.2.2 仪器
• 3.2.3 试剂
• 3.2.4 实验方法
• 3.2.4.1 药物的细胞毒性检测
• 3.2.4.2 药物的免疫抑制活性检测
• 3.2.4.3 药物对MLR的作用
• 3.2.5 统计学方法
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 药物的细胞毒性
• 3.3.2 药物抑制ConA激活的小鼠脾细胞增殖
• 3.3.3 Physalin H抑制混合淋巴细胞反应
• 3.4 讨论
• 第4章 Physalin H的时效性及其对细胞周期的影响
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 实验动物
• 4.2.2 仪器
• 4.2.3 试剂
• 4.2.4 实验方法
• 4.2.4.1 Physalin H的时效型
• 4.2.4.2 Physalin H对细胞周期的影响
• 4.2.5 统计学方法
• 4.3 实验结果
• 4.3.1 Physalin H对细胞抑制作用的时效性
• 4.3.2 Physalin H对细胞周期的影响
• 4.4 讨论
• 第5章 Physalin H对T淋巴细胞细胞亚型的影响
• 5.1 引言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 实验动物
• 5.2.2 仪器
• 5.2.3 试剂
• 5.2.4 实验方法
• 5.2.5 统计学方法
• 5.3 实验结果
• 5.4 讨论
• 第6章 Physalin H对Th1/Th2细胞因子平衡的影响
• 6.1 引言
• 6.2 材料与方法
• 6.2.1 实验动物
• 6.2.2 仪器
• 6.2.3 试剂
• 6.2.4 实验方法
• 6.2.5 统计学方法
• 6.3 实验结果
• 6.3.1 Physalin H对细胞上清中Thl细胞因子IL-2和IFN-γ分泌水平的影响
• 6.3.2 Physalin H对细胞上清中Th2细胞因子IL-4和IL-10分泌水平的影响
• 6.4 讨论
• 第7章 Physalin H对T细胞中HO-1表达的影响
• 7.1 引言
• 7.2 材料与方法
• 7.2.1 实验动物
• 7.2.2 仪器
• 7.2.3 试剂
• 7.2.4 实验方法
• 7.2.4.1 总蛋白的提取和定量
• 7.2.4.2 Western印迹法测定Physalin H对蛋白HO-1表达的影响
• 7.2.4.3 RT-PCR法检测Physalin H对HO-1基因的转录变化
• 7.2.5 统计学方法
• 7.3 实验结果
• 7.3.1 Physalin H对T淋巴细胞中HO-1蛋白表达的影响
• 7.3.2 Physalin H对T淋巴细胞中HO-1 mRNA表达的影响
• 7.4 讨论
• 第8章 Physalin H对小鼠体内炎症的影响
• 8.1 引言
• 8.2 材料与方法
• 8.2.1 实验动物
• 8.2.2 仪器
• 8.2.3 试剂
• 8.2.4 实验方法
• 8.2.4.1 小鼠耳廓肿胀的体内实验
• 8.2.4.2 ELISA方法检测耳廓肿胀模型小鼠的血清中细胞因子IL-2、IL-6
• 8.2.5 统计学方法
• 8.3 实验结果
• 8.3.1 Physalin H对小鼠耳肿胀的抑制作用
• 8.3.2 Physalin H作用后血清中细胞因子的变化
• 8.4 讨论
• 第9章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 论文发表情况
• 专利申请情况
• 卷内备考表