人工蛹虫草质量标准及指纹图谱研究

论文摘要

蛹虫草,又名北冬虫夏草,其功效类似于野生的冬虫夏草,具有补肺益肾、止血化痰、抗疲劳耐缺氧、调节免疫、辅助抗肿瘤等作用。由于其对自然生长环境要求不高,人工培育较为成功,有望成为冬虫夏草的替代品而造福于人类。目前市场上有较多人工培育的蛹虫草,但无统一规范的质量控制方法,中国药典中也没有关于蛹虫草质量控制的标准。为了确保人工蛹虫草合理有效的应用,使其质量评价有具体的量化指标,本文以大米为培养基的蛹虫草子实体为研究对象,系统地建立了药材的质量标准,并采用了包括指纹图谱在内的质量控制手段,为人工蛹虫草的质量控制研究提供了可以借鉴的思路和方法,为以后药材的质量评价提供了相应的依据。本论文按照2005版《中国药典》中相关规定,系统地研究了人工蛹虫草质量控制的各项指标,包括性状、鉴别、检查及含量测定等项。运用正交试验设计筛选腺苷和虫草素的最佳提取条件,确定制备方法为:20%甲醇30倍,超声提取10min;采用高效液相色谱法同时对腺苷和虫草素进行含量测定,腺苷在23.2 ng～464ng的范围内线性关系良好(r = 0.9999),平均加样回收率为98.92%(RSD=1.17%),虫草素在30ng～600ng的范围内线性关系良好(r = 0.9999),平均加样回收率为99.37%(RSD=1.42%)。结果表明该提取和测定方法操作简单,重复性好,结果准确可靠,为评价药材质量提供了依据。按照《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》中相关规定,采用HPLC/DAD法制定人工蛹虫草药材的指纹图谱。通过分析方法的建立,确定采用Agilent TC–18 (5μm,4.6×250mm)色谱柱,甲醇–0.02mol/L KH2PO4溶液梯度洗脱,分析时间60min,检测波长260nm,进样量10μL,流速1.0mL/min,柱温30℃的色谱指纹图谱条件,经方法学考察证明该方法准确可靠。对12批人工蛹虫草样品进行指纹图谱分析,标定了15个共有峰,并对其中的尿苷、腺苷、虫草素色谱峰进行了指认。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》计算指纹图谱相似度,结果12批蛹虫草与对照指纹图谱的相似度均在0.90以上,表明各批次人工蛹虫草之间具有较好的一致性。对15批不同产地的人工蛹虫草进行HPLC指纹图谱分析,将所得特征数据利用系统聚类分析方法进行分类,分析结果将15批药材分为2类,其中I类为推荐品,II类为非推荐品。在此基础上采用逐步判别分析法,建立典则判别函数和Bayes判别函数,选择交互验证法对判别函数的效果进行验证,结果表明判别相符率达100%。两类判别函数的建立,为未知样品的鉴定提供了一个准确、快捷的工具。本研究系统地建立了人工蛹虫草药材的质量评价体系,为全面、科学、有效地控制其质量奠定了理论基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 人工蛹虫草质量标准研究
• 一、实验材料及仪器
• 二、性状
• 三、鉴别、检查及浸出物
• 四、含量测定
• 五、本章小结
• 第二章 人工蛹虫草指纹图谱研究
• 一、实验材料及仪器
• 二、指纹图谱分析方法的建立
• 三、指纹图谱方法学考察
• 四、指纹图谱的构建
• 五、本章小结
• 第三章 指纹图谱的化学模式识别研究
• 一、实验材料及仪器
• 二、指纹图谱的采集
• 三、系统聚类分析
• 四、逐步判别分析
• 五、本章小结
• 结论
• 一、全文工作总结
• 二、本论文的创新之处
• 三、存在的问题与展望
• 参考文献
• 综述
• 一、中药指纹图谱概述
• 二、蛹虫草研究进展
• 致谢
• 附录 攻读学位期间发表论文目录