论文摘要
第一部分鼠巨细胞病毒感染BALB/c小鼠心肌炎模型的建立目的建立鼠巨细胞病毒感染心肌炎动物模型。方法用TCID5010-4MCMV病毒悬液经腹腔注射感染BALB/c小鼠。对小鼠进行心肌组织病毒滴度检测、病理学检查和心电图记录。结果小鼠心肌炎发病率为69.4%,死亡高峰在第7~14d,死亡率为11.11%,生存率为88.89%。44.5%的感染鼠出现心外膜炎。病理学检查,第7天,心肌细胞出现肿胀、变性,血管周围有大量炎症细胞灶性浸润。第14天,可见单个心肌细胞核固缩、溶解,心肌细胞小灶性坏死、崩解,周围见单核细胞、淋巴细胞浸润。病变于感染后7~14d达高峰,第14天后开始减轻。本实验组全部心肌病变积分均在2分及以下,属轻度心肌炎改变。感染小鼠心电图的改变率达50%。病毒感染组小鼠心肌组织病毒滴定14d以内为阳性,14d以后为阴性。结论本心肌炎动物模型为探讨巨细胞病毒性心肌炎的发病机理、转归及抗病毒药物的筛选提供了有力的工具。第二部分抗心肌自身抗体在鼠巨细胞病毒性心肌炎中的作用目的探索抗β1肾上腺素能受体抗体、抗M2乙酰胆碱能受体的自身抗体、抗心肌细胞线粒体内膜ADP/ATP载体蛋白抗体和抗心肌肌球蛋白重链抗体在鼠巨细胞病毒性心肌炎中的作用。方法用ELISA方法检测巨细胞病毒性心肌炎小鼠血清中抗β11肾上腺素能受体抗体、抗M2乙酰胆碱能受体的自身抗体、抗心肌细胞线粒体内膜ADP/ATP载体蛋白抗体和抗心肌肌球蛋白重链抗体滴度。结果实验组和对照组小鼠血清抗β11肾上腺素能受体抗体、抗M2乙酰胆碱能受体的自身抗体、抗心肌细胞线粒体内膜ADP/ATP载体蛋白抗体和抗心肌肌球蛋白重链抗体滴度和阳性率比较,实验组比对照组高,经统计学处理,P<0.01,差异有显著性意义。结论抗抗β1肾上腺素能受体抗体、抗M2乙酰胆碱能受体的自身抗体、抗心肌细胞线粒体内膜ADP/ATP载体蛋白抗体和抗心肌肌球蛋白重链抗体可能参与鼠巨细胞病毒性心肌炎的发病过程。第三部分细胞因子在小鼠巨细胞病毒性心肌炎心肌组织中的表达和作用目的探讨IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α在MCMV病毒性心肌炎中的表达和作用。方法运用免疫组化技术检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α免疫反应阳性细胞在MCMV病毒性心肌炎心肌组织中的表达。采用实时荧光定量PCR方法检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-αmRNA在MCMV病毒性心肌炎心肌组织中的表达。应用Western blotting方法检测细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α蛋白在MCMV病毒性心肌炎心肌组织中的表达。结果免疫组化检测了病毒感染后3d、7d和14d IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α在心肌组织的表达,实验组IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α表达阳性细胞数与对照组相比,P<0.01(7d和14d);P<0.05(3d)。实时荧光定量PCR检测了病毒感染后14d IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α基因在心肌组织的表达,实验组与对照组相比,P<0.01。Western blotting检测了病毒感染后14d IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α蛋白在心肌组织的表达,实验组与对照组相比,P<0.01。结论细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α在MCMV病毒性心肌炎心肌组织中高表达。IL-1β和TNF-α可能对心肌组织有损害作用,而IL-6和IL-10可能对心肌组织有保护作用,它们可能共同参与了心肌炎的发病机理。
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