大蒜素对家蚕病原真菌的抑制作用及机理研究

论文摘要

为了解决在蚕病防治中所造成的环境污染问题,以开发植物源药剂为目的,探明大蒜素的抑菌功能,本文从对家蚕具有高毒力菌株的筛选开始,系统研究了大蒜素对家蚕具有高毒力病原白僵菌的抑制作用,探讨了外界条件对大蒜素稳定性的影响,并从大蒜素对真菌膜功能的影响方面进行了抑菌机理的研究。实验结果将为开发大蒜素为新型蚕药提供依据。1.几种对家蚕高毒力白僵菌菌株的筛选以分离的5株白僵菌菌株为材料,对其营养生长量、产孢量和致病力等生物学指标进行了综合比较,结果表明:不同菌株的各个指标均存在差异,其中B07-2营养生长量最快,产孢量最高,10d内对家蚕的致病率为98.18%,其对家蚕的致死中时LT50为5.09d,致死中浓度LC50为2.69×106孢子/mL。2.大蒜素对家蚕病原真菌（B07-2）的抑制作用通过对大蒜素对家蚕病原白僵菌B07-2的孢子萌发和菌落扩散的抑制作用的测定,得出大蒜素对家蚕病原白僵菌的抑制作用随浓度的升高而升高,在大蒜素浓度为10μL/mL时,抑制作用最强,3d的抑制率分别为92.67%和91.07%,抑制中浓度IC5O分别为2.79μL/mL和1.41μL/mL。通过对最小抑制浓度（MIC）和最小致死浓度（MLC）的测定,得出大蒜素对白僵菌Bb07-2的MIC和MLC分别为5.00μL/mL和7.50μL/mL。3.酸碱度和温度对大蒜素抑制效果的影响通过pH值和温度对大蒜素抑菌效果的影响测定得出,大蒜素在中性和酸性（pH≤7）和温度低于60℃条件下的抑菌效果稳定,在碱性（pH＞7）和高温（＞80℃）环境下,抑菌效果明显降低,说明大蒜素是对碱和热不稳定的物质。4.大蒜素对家蚕病原白僵菌（B07-2）抑制机理研究为了探讨大蒜素对真菌膜功能的影响,分析了大蒜素对真菌在生长过程中吸收利用营养物质速率的影响、大蒜素浓度与原生质膜伤害率的关系、大蒜素对白僵菌细胞离子运输和离子梯度维系能力的影响,用考马斯亮蓝G-250染色法、3,5-二硝基水杨酸比色法、外渗电导法以及A7Pase测试盒分别进行测定,结果表明:大蒜素处理后的病原白僵菌在生长过程中对蛋白质和糖的吸收利用速率比对照分别降低了64.83%和69.64%:对病原白僵菌细胞内电解质外渗率的伤害率随大蒜素浓度的升高而增加,也就是对细胞原生质膜的伤害率增大;对A7Pase活力测定发现大蒜素处理组与对照组比较而言,真菌细胞中的各种A7Pase活力都有大幅度的降低。其中Na+K+-ATPase降低了84.36%,Ca++Mg++-ATPase活力降低了75.35%。上述结果说明,说明大蒜素可以损伤病原白僵菌的细胞膜功能,从而影响病原白僵菌的生长。通过上述研究,为大蒜素作为植物源型蚕药的开发及其他同类产品的开发奠定了前期试验基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 综述
• 1 家蚕病原真菌的危害特点及发致病原因
• 2 家蚕真菌病的防治现状
• 3 植物源农药的开发
• 4 大蒜素的研究新进展
• 4.1 大蒜素的结构及其性质
• 4.2 大蒜素提取方法的研究
• 4.3 大蒜素的药理活性
• 4.3.1 抗肿瘤活性
• 4.3.2 降血压和血脂活性
• 4.3.3 抗血小板聚集活性
• 4.3.4 抗氧化活性
• 4.3.5 抗微生物活性
• 4.4 大蒜素的抗生活性作用机理
• 5 大蒜素的应用及前景
• 5.1 大蒜素在医学临床上的应用
• 5.2 大蒜素在畜牧业中的应用
• 5.2.1 大蒜素的抗菌作用
• 5.2.2 大蒜素的诱食助消化作用
• 5.2.3 大蒜素的防霉驱虫作用
• 5.2.4 大蒜素可提高机体免疫力和减少体内过氧化物
• 5.3 大蒜素的应用前景
• 材料与方法
• 1 几种对家蚕高毒力白僵菌菌株的筛选
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.2.1 白僵菌营养生长量的测定
• 1.2.2 白僵菌产孢量测定
• 1.2.3 白僵菌对家蚕致病力的测定
• 1.2.4 高毒力菌株致死中浓度的测定
• 2 大蒜素对家蚕病原真菌（B07-2）的抑制作用
• 2.1 大蒜素对病菌孢子萌发抑制活性
• 2.2 大蒜素对病原真菌菌落扩散的抑制作用
• 2.3 最小抑制浓度（MIC）和最小致死浓度（MLC）的测定
• 2.3.1 最小抑制浓度测定
• 2.3.2 最小致死浓度测定
• 3 酸碱度和温度对大蒜素抑菌效果的影响试验
• 3.1 酸碱度对大蒜素抑菌稳定性的影响
• 3.2 温度对大蒜素抑菌效果的影响试验
• 4 大蒜素对家蚕病原真菌（B07-2）的抑制机理研究
• 4.1.大蒜素对家蚕病原真菌生长过程中吸收利用蛋白质能力的影响
• 4.1.1 试验药剂
• 4.1.2 标准曲线制作
• 4.1.3 蛋白质含量测定
• 4.2 大蒜素对家蚕病原真菌生长过程中吸收利用还原糖能力的影响
• 4.2.1 试验药剂
• 4.2.2 葡萄糖标准曲线的制作
• 4.2.3 还原糖含量的测定
• 4.3 大蒜素对病原真菌孢子质膜通透性的影响试验
• 4.4 大蒜素对病原真菌细胞膜上几种ATPase活力影响试验
• 结果与分析
• 1 几种对家蚕高毒力白僵菌菌株的筛选
• 1.1 白僵菌营养生长测定结果
• 1.2 白僵菌产孢量测定
• 1.3 白僵菌对家蚕致病力测定
• 1.3.1 校正累计死亡率
• 1.3.2 致死速度
• 1.3.3 僵虫率
• 50)'>1.4 B07-2菌株对家蚕的致死中浓度(LC₅₀)
• 2.大蒜素对家蚕病原真菌的抑制作用
• 2.1 大蒜素对病菌孢子萌发抑制活性
• 2.2 大蒜素对病原菌菌落扩散的抑制作用
• 2.3 最小抑制浓度（MIC）和最小致死浓度（MLC）的测定
• 3 外界条件对大蒜素抑菌效果的影响试验
• 3.1 酸碱度对大蒜素抑菌稳定性的影响
• 3.2 温度对大蒜素抑菌效果的影响试验
• 4 大蒜素对家蚕病原白僵菌（B07-2）抑制机理研究
• 4.1 大蒜素对家蚕病原真菌生长过程中吸收利用糖和蛋白质能力的影响
• 4.1.1 大蒜素对真菌蛋白质合成影响
• 4.1.1.1 标准曲线的绘制
• 4.1.1.2 蛋白含量测定
• 4.1.2 大蒜素对真菌还原糖含量的影响
• 4.1.2.1 标准曲线的绘制
• 4.1.2.2 还原糖含量测定
• 4.2 大蒜素对病原真菌孢子质膜通透性的影响试验
• 4.3 大蒜素对病原真菌细胞膜上几种ATPase活力影响试验
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介
• 研究生期间发表论文