化妆品用抗敏抗刺激活性物质的筛选、提取及作机理研究

论文摘要

皮肤过敏与刺激是指机体受到某些抗原刺激时,出现以生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的异常的免疫性应答,主要分为变应性接触性皮炎和刺激性接触性皮炎两大类。针对其两者的发生机制,本文对25种具有抗敏抗刺激功效的植物提取物进行了筛选、对其主要功效成分的含量、提取及工艺优化、作用途径和作用机理进行了研究。通过RBC溶血实验、透明质酸酶体外抑制实验和改良RBC溶血实验对25种植物提取液进行了刺激性、抗敏功效、抗刺激功效进行筛选。米邦塔仙人掌粉提取液的抗敏抗刺激效果最好,其1.0%水溶液的RBC溶血率、透明质酸酶体外抑制率、对SDS致损血红细胞的抑制率分别为3.1%、97.1 %、46.4 %。化学成分分析表明仙人掌提取液主要功效成分为仙人掌多糖类物质,约占可溶性固形物含量的73.9 %。比较酶解辅助浸提和传统水提米邦塔仙人掌多糖的效果,结果表明纤维素酶酶解能使多糖溶出量增加15 %;蛋白酶能使总可溶性固形物的含量提高18.5 %;酶解会使提取液中离子强度明显增加,较热水浸提液增加23 %。单因素考察,液料比1525,浸提温度4060℃,浸提时间大于1.0 h时,仙人掌多糖得率较高。采用Box-Benhnken中心组合试验及响应面和实际操作分析,确定了仙人掌粗多糖提取优化参数:液料比20:1、浸取时间2 h;浸取温度50℃,此时提取液中多糖的平均含量为17.6 mg/mL。采用离子交换树脂对米邦塔仙人掌粉提取液进行脱盐脱色处理。通过静态筛选,从12组不同类型树脂中选出001×7-D309离子交换树脂组效果最好,其脱盐率约为92.0%,脱色率约为78.6%。动态实验确定001×7-D309离子交换树脂脱盐脱色的最优流速为4 BV·h-1,在7倍树脂体积的上样量情况下,脱盐率可达到96.0%,,脱色率达到80.0%以上,001×7与D309树脂对仙人掌粉提取液中可溶性固形物均有约0.7%的吸附损失。在7次之内的循环再生使用中,001×7-D309离子交换树脂的脱盐率和脱色率分别稳定在95.096.0%和80.0%左右,且再生性能良好。实验首次发现T-G体系对溶液电导率具有降低作用,且呈现较好的线性关系。10 %的T物质能使溶液电导降低到63 %左右;而10%的T物质和23%的G复配能使溶液电导降低到32 %左右。7种化妆品稳定性测试均表明,10%的T物质和23%的G有助于提高提取液的稳定性。实验所得的抗敏抗刺激复配液在2.0 %的使用量时,其透明质酸酶抑制率、O2、?OH和DPPH自由基的清除能力能够分别达到87.3 %、76.0%、68.1%和77.8%,表明具有很好的抗敏和清除自由基功效。UV照射35 min之内,添加5.0%复配液的RBC悬液较正常UV照射的RBC发生溶血时间较慢。ELLSA法测定5%的复配液对血管内皮细胞生长因子受体Flt1的抑制率最大,达到35.4 %,表明抗敏抗刺激复配液具有一定的抑制UV辐射损伤细胞和抑制毛细血管扩张的功效。通过RBC溶血刺激模型和彗星实验检测抗敏抗刺激复配液对SDS致细胞膜刺激损伤和小鼠肝细胞DNA损伤的抑制效果。结果表明复配液质量浓度在20100μg/mL之间时,其自身对细胞膜和DNA无损伤,但对SDS致损RBC细胞膜和DNA具有抑制功能。当浓度在4080μg/mL时,其对SDS致细胞膜损伤的抑制作用呈现较好的量效关系。荧光显微镜下,浓度大于60μg/mL时,复配液抑制DNA损伤能力明显。在100μg/mL的使用量时,细胞彗星状头尾较集中,其抑制SDS对DNA的损伤效果显著,可使DNA损伤细胞拖尾率和彗尾长度分别降低58 %和57.8 %。复配液对粪大肠杆菌群（Fecal coliforms）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）能够抑制其对数期初期的生长。在透射电镜下观察,经抗敏抗刺激液作用10 h后微生物的生长、繁殖和代谢均受到抑制,菌体结构造成破坏,菌体扭曲变形,进而细胞壁破裂内容物外漏,直至成为空壳或分解为颗粒状残渣,这与其对动物血红细胞的保护作用形成截然相反的作用效果。人体功效评价表明抗敏抗刺激复配液具有明显的即时镇静皮肤不适症状的功效,有效率为86.9%;能够明显增强皮肤耐受性;5.0 %抗敏抗刺激复配液的膏霜在60 min内,皮肤红肿消退率达到52.7 %;辣椒素致痒再涂抹膏霜10 min后,瘙痒减少77.8%。临床功效验证结果表明,施用含5.0 %复配液的膏霜后,患者皮肤敏感性、瘙痒程度和红肿程度总体改善效果的评价为93.6 %、95.5 %和91.3 %的有效率,且97.8 %的受试者认为含5.0 %复配液膏霜的安全性及耐受性“非常好”或“好”。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 皮肤过敏与皮肤刺激的产生机制和类型
• 1.1.1 皮肤过敏的发生机制
• 1.1.2 皮肤过敏及其致敏原的特点
• 1.1.3 皮肤刺激的发生机制
• 1.1.4 皮肤刺激及其致敏原的特点
• 1.1.5 皮肤过敏与皮肤刺激的常见致敏原
• 1.2 化妆品抗敏抗刺激的途径
• 1.2.1 隔离致敏原
• 1.2.2 抑制组胺等炎症介质的释放
• 1.2.3 增强皮肤屏障功能
• 1.2.4 清除过剩自由基
• 1.2.5 消炎止痒及皮肤敏感刺激的其他症状
• 1.3 抗过敏与抗刺激的常见检测方法
• 1.3.1 皮肤参数的综合评定
• 1.3.2 主观和半主观评定
• 1.3.3 透明质酸酶体外抑制实验
• 1.3.4 动物实验和人体斑贴实验
• 1.3.5 RBC 刺激性测试模型
• 1.4 化妆品添加剂中常见的抗敏抗刺激植物源添加剂
• 1.4.1 燕麦生物碱
• 1.4.2 茶多酚
• 1.4.3 仙人掌提取物
• 1.4.4 马齿苋提取物
• 1.5 立题的背景、意义及技术路线
• 1.5.1 立题的背景和意义
• 1.5.2 实验技术路线
• 1.6 论文的主要内容及创新和突破点
• 1.6.1 论文的主要内容
• 1.6.2 主要创新和突破点
• 第二章 25 种植物提取液抗敏抗刺激功效的筛选
• 2.1 引言
• 2.2 材料、试剂与设备
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 主要设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 各植物提取液的制备
• 2.3.2 RBC 溶血实验测定植物提取液刺激性
• 2.3.3 透明质酸酶体外抑制法测定抗敏功效
• 2.3.4 改良RBC 溶血实验测定抗刺激效功效
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 25 种植物提取液刺激性的测定结果
• 2.4.2 25 种植物提取液抗敏功效的测定结果
• 2.4.3 25 种植物提取液抗刺激功效的测定结果
• 2.5 本章小结
• 第三章 抗敏抗刺激提取液各成分的含量分析
• 3.1 引言
• 3.2 材料、试剂与设备
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 主要设备
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 米邦塔仙人掌提取液的制备
• 3.3.2 总糖含量的测定
• 3.3.3 蛋白含量的测定
• 3.3.4 总黄酮含量的测定
• 3.3.5 总酚含量的测定
• 3.3.6 可溶性固形物含量的测定
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 米邦塔仙人掌提取液的总糖含量
• 3.4.2 米邦塔仙人掌提取液的蛋白含量
• 3.4.3 米邦塔仙人掌提取液的总黄酮含量
• 3.4.4 米邦塔仙人掌提取液的总酚含量
• 3.4.5 米邦塔仙人掌提取液的可溶性固形物含量
• 3.5 本章小结
• 第四章 化妆品用抗敏抗刺激提取液的提取工艺优化
• 4.1 引言
• 4.2 材料、试剂与设备
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 主要试剂
• 4.2.3 主要设备
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 热水浸提和酶法提取米邦塔仙人掌多糖
• 4.3.2 响应面法优化米邦塔仙人掌多糖的提取工艺
• 4.3.3 米邦塔仙人掌提取液的脱盐脱色离子层析
• 4.3.4 化妆品用仙人掌抗敏抗刺激液的复配稳定体系的建立
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 热水浸提和酶法提取米邦塔仙人掌多糖的对比
• 4.4.2 响应面法对米邦塔仙人掌多糖提取工艺的优化
• 4.4.3 仙人掌多糖液离子交换树脂脱盐脱色的静态筛选
• 4.4.4 001×7-D309 树脂组离子交换流速的确定
• 4.4.5 001×7-D309 树脂组的再生性能
• 4.4.6 化妆品用抗敏抗刺激液的复配稳定体系的建立
• 4.5 本章小结
• 第五章 抗敏抗刺激提取液作用途径及机理的研究
• 5.1 引言
• 5.2 材料、试剂与设备
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.2 主要试剂
• 5.2.3 主要设备
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 透明质酸酶体外抑制法检测复配液的抗敏效果
• 5.3.2 抗敏抗刺激液对不同自由基清除率的测定
• 5.3.3 RBC 溶血刺激模型检测对SDS 致细胞膜刺激损伤的抑制
• 5.3.4 抗敏抗刺激液对动物细胞和常见菌细胞作用途径的差异
• 5.3.5 单细胞凝胶电泳检测对SDS 致DNA 刺激损伤的抑制
• 5.3.6 抗敏抗刺激液预防UV 损伤细胞的能力
• 5.3.7 ELLSA 法检测抗敏抗刺激液对Flt1 活性的抑制
• 5.4 结果与讨论
• 5.4.1 抗敏抗刺激液抑制透明质酸酶的量效关系
• 5.4.2 抗敏抗刺激液对不同自由基的清除率
• 5.4.3 抗敏抗刺激液对SDS 致RBC 细胞膜刺激损伤的抑制
• 5.4.4 抗敏抗刺激液对动物细胞膜和常见菌细胞作用的差异
• 5.4.5 抗敏抗刺激液对SDS 致DNA 刺激损伤的抑制
• 5.4.6 抗敏抗刺激液预防UV 损伤细胞的能力
• 5.4.7 抗敏抗刺激液对血管内皮细胞生长因子受体Flt1 的活性的抑制
• 5.5 本章小结
• 第六章 抗敏抗刺激液人体和临床功效评价
• 6.1 引言
• 6.2 实验材料
• 6.3 实验方法
• 6.3.1 人体功效评价：即时镇静皮肤
• 6.3.2 人体功效评价：增加皮肤耐受性
• 6.3.3 人体功效评价：减轻皮肤红肿
• 6.3.4 人体功效评价：减轻瘙痒
• 6.3.5 临床功效验证：降低皮肤敏感性
• 6.3.6 临床功效验证：减少皮肤瘙痒
• 6.3.7 临床功效验证：消除皮肤红肿
• 6.4 结果与讨论
• 6.4.1 人体功效评价之即时镇静皮肤
• 6.4.2 人体功效评价之增加皮肤耐受性
• 6.4.3 人体功效评价之减轻红肿
• 6.4.4 人体功效评价之减少瘙痒
• 6.4.5 临床功效验证之降低皮肤敏感性
• 6.4.6 临床功效验证之减少皮肤瘙痒
• 6.4.7 临床功效验证之消除皮肤红肿
• 6.5 本章小结
• 第七章 结论与展望
• 7.1 主要结论
• 7.2 展望
• 参考文献
• 附录
• 附录A：T-G 稳定体系对抗敏抗刺激液稳定性的影响
• 在学期间发表的学术论文及研究成果
• 1、已发表的论文
• 2、申请的国家发明专利
• 致谢