家兔（Oryctolagus curiculus）角膜内皮细胞系的建立及其生物相容性研究

论文摘要

角膜内皮盲是一种常见的角膜病,尽管可以通过角膜移植来治愈,但由于角膜的捐献数量极其有限和患者的排斥反应而使许多患者无法重见光明。人工角膜组织工程技术是当今治疗角膜内皮盲等的研究热点,其亟需解决的关键问题之一是如何获得足量的角膜内皮细胞。而角膜内皮细胞的规模化体外培养是获得大量角膜内皮细胞的理想途径,也是人工角膜的重要研究内容之一,对于角膜病理生理学、药理毒理学、免疫学、分子生物学研究均具有重要意义。但到目前为止,仍没见到有关家兔角膜内皮细胞未经转染而成功建系的报道。为了探索哺乳动物角膜内皮细胞的建系技术,以便为组织工程化人工角膜提供足量的细胞材料,本文以家兔角膜内皮为材料,对角膜内皮细胞的体外培养、细胞系的建立及其鉴定展开了研究。 为了成功启动家兔角膜内皮细胞的体外培养,本文取活家兔的角膜,用氯化汞溶液和庆大霉素依次进行消毒,经0.25%胰蛋白酶液部分处理角膜内皮层后,将角膜内皮面朝下贴于24孔培养板中,补加含有硫酸软骨素、硫酸软骨素氧化降解物、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐、氨基葡萄糖盐酸盐、家兔角膜基质细胞培养液、牛眼生素、EGF和bFGF的DMEM-F12培养液（20%胎牛血清）,置入37℃、5%CO2培养箱中培养。为了获得纯净的角膜内皮细胞,每隔12～48小时进行揭膜和转孔再培养,进而成功启动了家兔角膜内皮细胞的原代培养。原代培养中的角膜内皮细胞多为四角形或多边形,一周后逐渐伸展成为多角形的内皮样,三周后细胞长成单层,此时细胞饱满、透光性好。待角膜内皮细胞长成单层后,便采用胰蛋白酶消化法进行传代培养。传代培养中的细胞,开始时绝大多数为多角形内皮样形态,但随着传代次数增加,逐渐转变为内皮样与成纤维样两种细胞形态共存的生长状态。传至第49代的角膜内皮细胞,主要呈现为成纤维样细胞形态,其生长与分裂状况良好。此时,细胞群体的倍增时间为2.24天,

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 文献综述
• 1. 角膜内皮细胞研究概况
• 1.1 角膜内皮细胞的形态特征
• 1.2 角膜内皮细胞的功能
• 1.3 角膜内皮细胞的增殖
• 1.4 角膜内皮细胞与生长因子
• 2 角膜内皮细胞体外培养研究
• 2.1 消化培养法
• 2.2 组织贴片培养法
• 2.3 揭膜培养法
• 3 角膜内皮细胞移植
• 4 小结
• 第二章 家兔角膜内皮细胞原代培养的启动
• 1. 实验用品
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验药品
• 1.4 常用溶液配方
• 2. 实验方法
• 2.1 培养板的处理
• 2.2 角膜材料的获取
• 2.3 角膜内皮细胞的原代培养的启动
• 3. 实验结果
• 4. 讨论
• 第三章 家兔角膜内皮细胞系的建立及鉴定
• 1. 实验用品
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 主要试剂
• 1.4 常用溶液配方
• 2. 实验方法
• 2.1 角膜内皮细胞传代培养
• 2.2 角膜内皮细胞的冻存
• 2.3 角膜内皮细胞的复苏
• 2.4 角膜内皮细胞生长特性
• 2.5 角膜内皮细胞染色体组型分析
• 3. 实验结果
• 3.1 传代培养的角膜内皮细胞
• 3.2 复苏的角膜内皮细胞
• 3.3 角膜内皮细胞的生长特性
• 3.4 染色体组型分析
• 4. 讨论
• 第四章 家兔角膜内皮细胞与膜生物相容性研究
• 1. 实验用品
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验药品
• 2. 实验方法
• 2.1 生物膜的消毒处理
• 2.2 角膜内皮细胞在壳聚糖生物膜上的培养
• 3. 实验结果
• 4. 讨论
• 参考文献