防治鱼类细菌性疾病复合型蛋黄粉的研制

论文摘要

伴随着渔业的迅猛发展,鱼类细菌性疾病成为鱼类最严重的一大类传染性疾病,造成了巨大的危害和经济损失,防治策略主要有药物防治、免疫防治和抗病育种。与畜禽传染病的防治相比,我国鱼病防治研究明显落后。在理论上,鱼的抗病育种具有一劳永逸的效果,但这是一个漫长的过程,也难以获得对多种疾病具有抗性的品种。既无行之有效的水体环境控制策略和措施,也无效果显著和易于推广的疫苗,因此形成对化学药物和抗菌素的过分依赖,它们的长期、大量和盲目使用,不仅导致病原体耐药性的产生、防治效果日益降低,而且已形成严重的水环境污染和水产品中有害物质的大量残留,严重威胁着人类健康。因此,只有大力开发和合理使用水产专用药物,才能更有效地防治水产动物疾病,保护人类自身的健康和安全。鸡卵黄抗体(IgY)作为一种免疫球蛋白,和血清抗体(IgG)的功能相似,且生产成本较低,易大量生产,不会带来耐药和药物残留等一系列问题,有望开发为一类可替代抗生素的高效生物防治制剂。本研究对若干鱼类主要病原菌及其致病性进行验证后,对各抗原之间的交叉反应性进行了研究,还比较了IgY的四种提取方法以及酶联免疫吸附试验(ELISA)与微量凝集反应(MA)两种检测方法。结果表明,各菌株之间几乎不能交叉反应,通过比较,IgY的最佳提取方法被确定,并决定采用微量凝集反应作为检测IgY的方法。在此基础上用微量凝集法定期检测由不同免疫程序获得的IgY效价并制定效价曲线,结果显示,有的抗原之间有免疫竞争或抑制现象,用三联苗免疫产蛋鸡四次比较好。为了研究蛋黄粉的生物学活性,用喷雾干燥法把多免后的高效价蛋黄液制成蛋黄粉,由蛋黄粉IgY的凝集效价以及抑菌试验结果表明,喷雾干燥对IgY的效价和生物学活性基本不造成影响,凝集效价是24的含特异性抗体的卵黄水溶性组分(WSF)做625倍稀释后仍产生50%的相应抑菌效果,可见,蛋黄粉能有效地抑制相应细菌的生长与繁殖;对喷雾干燥工艺进行了非指定性细菌灭活试验,结果显示,该工艺能有效的灭活细菌;动物试验方面,用制备的高价蛋黄粉定期适量地投喂鲫鱼,确定了其安全性、可口性,并能增强鱼的抵抗力和产生一定特异性保护力,凝集效价是26的卵黄粉对1倍和2倍最小致死剂量的相应致病菌可分别产生90%和75%的保护效果,证实了高效价卵黄粉防治鱼类细菌性疾病的临床应用前景。另外,从各嗜水气单胞菌菌株提取了Aer毒素和ECPase,对他们及其生物学活性进行了验证。然后,设计不同的试验组,并用溶血抑制、溶蛋白抑制试验和微量凝集试验来检测并制备IgY效价曲线,结果显示,不同菌株的Aer毒素和ECPase能分别交叉抑制溶血和溶蛋白反应,可弥补菌株之间几乎不能交叉反应的缺陷,并进一步增强IgY的作用,而且三者之间之间不会相互抑制抗体的产生,都能产生较高水平抗体。为复合强化型全蛋粉的研制与应用奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 文献综述
• 一、鱼类细菌性疾病防治概况
• 二、卵黄抗体研究进展
• 三、嗜水气单胞菌及其致病因子的研究进展
• 研究内容一：菌株及其致病性的鉴定
• 材料和方法
• 结果与讨论
• 研究内容二：菌株交叉反应以及不同免疫程序 IgY 效价曲线的制作
• 材料与方法
• 结果与讨论
• 研究内容三：WSF 以及蛋黄粉生物活性的研究与应用
• 材料与方法
• 结果与讨论
• 研究内容四：主要致病因子卵抗的制备以及与菌体卵抗的相互影响
• 材料与方法
• 结果与讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢