论文题目: PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈功能的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 磨美兰
导师: 杨汉春
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒,猪肺泡巨噬细胞,外源性抗原递呈,凋亡,核酸动态
文献来源: 中国农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染可引起母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病、免疫抑制。猪肺泡巨噬细胞(PAM)是PRRSV感染的主要靶细胞。本研究用PRRSV HB-2(sh)/2002体外和体内感染PAM,分析PAM外源性抗原加工递呈相关分子的表达动态和抗原递呈能力的变化,检测PAM凋亡情况及其PRRSV核酸动态变化,从细胞与分子水平揭示PRRSV感染对PAM外源性抗原加工递呈功能的影响。 应用RT-PCR从PAM中扩增和克隆外源性抗原加工递呈相关SLA-DR分子、Ii链、CD40及PRRSV ORF7的部分基因片段,并利用反向PCR技术构建了相应的缺失cDNA竞争分子。采用竞争PCR方法,建立了各种分子的定量竞争RT-PCR的标准竞争曲线和直线回归方程。 用流式细胞术检测PAM表面SLA-DR分子的表达动态,用竞争PCR方法检测外源性抗原加工递呈功能相关分子SLA-DR、SLA-DM、Ii链以及共刺激分子CD40、CD80和CD86的mRNA表达动态。结果显示,体外感染后12h PAM中SLA-DR抗原、SLA-DR、SLA-DM mRNA表达降到最低;24h Ii链mRNA转录水平降到最低水平;CD40、CD80和CD86 mRNA后期升高明显。体内感染后3天SLADR抗原表达上升,7天之后一直低于对照组,SLA-DR的mRNA在3、7、14天处于低转录水平,28、42天时略高于对照组;感染后3天SLA-DM分子的mRNA转录下降(p<0.01),42天时升高(p<0.05);感染后3天Ii链的mRNA转录下降(p<0.01),28天和42天升高(p<0.01);感染后3天CD40的mRNA转录迅速下降(p<0.01),7天后上升(p<0.01),然后下降恢复正常;感染后3天CD80mRNA转录降低(p<0.05),之后上升,14天时达到最高峰,然后28天下降,42天恢复正常;感染后3天CD86mRNA转录水平大大降低(p<0.05),7天之后与对照组接近。由此表明,PRRSV感染早期对猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能产生显著影响,导致其外源性抗原递呈功能下降,进而影响机体的体液免疫应答。 采用自身混合淋巴细胞反应(AMLR)对PAM抗原递呈能力的分析结果显示,感染后3、7、28和42天PAM的抗原递呈能力下降,说明PRRSV对PAM的抗原递呈能力可产生长时间的抑制作用,这可能是PRRSV造成免疫抑制的机制。 分别采用Annexin V-FITC/PI双染色法和定量竞争PCR技术检测PAM中的凋亡细胞和PRRSV核酸动态。结果显示PRRSV体外感染后4h和36h PAM出现两次凋亡高峰;体内感染后28天出现凋亡高峰(p<0.01)。体外感染后4-48h可从PAM中检测到PRRSV核酸,其中4h核酸含量最高,然后一直降低;体内感染后3-42天可从PAM中检测到PRRSV核酸,其中3天PAM中PRRSV核酸含量最高,然后一直降低。提示了PRRSV感染可诱导PAM发生凋亡;PRRSV在PAM中可能长期存在;PAM出现凋亡高峰时PRRSV含量较低;PAM中PRRSV高水平复制与SLA-DM、Ii链和共刺激分子CD40、CD80和CD86的mRNA水平降低有一定的相关性;PRRSV诱导的PAM凋亡与PAM的抗原递呈能力无相关性。 综合以上结果表明,感染早期猪肺泡巨噬细胞的外源性抗原加工和递呈功能下降,从而影响机体对PRRSV本身和其他病原微生物的体液免疫应答。PRRSV感染造成猪的肺泡巨噬细胞抗原加工递呈能力的下降和凋亡,是PRRSV导致免疫抑制的机制。
论文目录:
摘要
Abstract
插图与附表清单
缩略词表
第一章 引言
1.1 国内外研究现状1
1.2 研究目的与意义
1.3 研究内容与技术路线
1.4 研究目标
第二章 外源性抗原加工递呈相关分子、共刺激分子和PRRSV定量竞争RT-PCR标准竞争曲线的构建
2.1 前言
2.2 材料与方法8
2.3 结果与分析
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子和共刺激分子的影响
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.3 结果与分析
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞抗原递呈能力的影响
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.3 结果与分析
4.4 讨论
4.5 小结
第五章 PRRSV感染诱导的猪肺泡巨噬细胞凋亡与PRRSV核酸动态分析
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.3 结果与分析
5.4 讨论
5.5 小结
第六章 结论
第七章 创新点
第八章 文献综述
8.1 PRRSV侵入肺泡巨噬细胞的机制
8.2 PRRSV引起的肺部病理学变化
8.3 PRRSV对肺泡巨噬细胞数量的影响
8.4 PRRSV对肺泡巨噬细胞吞噬杀菌功能的影响
8.5 PRRSV的持续性存在
8.6 PRRSV诱导的肺泡巨噬细胞凋亡
8.7 PRRSV对肺和肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的影响
8.8 PRRSV对肺泡巨噬细胞抗原递呈功能的影响
参考文献
致谢
附录
作者简介
发布时间: 2005-07-18
参考文献
- [1].家猫pFLA Ⅰ-167W/S和CD8αα精细结构与递呈抗原表位结构机理的研究[D]. 梁瑞英.中国农业大学2018
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标签：猪繁殖与呼吸综合征病毒论文; 猪肺泡巨噬细胞论文; 外源性抗原递呈论文; 凋亡论文; 核酸动态论文;