“三联法”对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡与增殖影响的研究

论文摘要

目的 以中药熏洗、手法弹拨、练功疗法（以下简称“三联法”）治疗兔膝骨关节炎（Osteoarthritis，OA），通过对膝关节软骨标本进行透射电镜超微结构观察，采用流式细胞术、免疫组化、末端原位标记、原位杂交分别检测软骨细胞凋亡与增殖状况。观察“三联法”治疗兔膝OA的效果及其对OA软骨细胞凋亡和增殖的影响，并通过与三法的单独运用、外用扶他林对照比较，研究它们治疗OA疗效的差别，为临床中医药外治OA提供实验依据。 方法 取56只四月龄健康日本大耳白兔，随机分为7组（每组8只）：8只不造模作为正常对照组，其余48只用结扎右侧股静脉的方法造模，8周后复制成右膝骨关节炎模型，随后分为模型对照组、中药熏洗组、功能锻炼组、手法弹拨组、三联法组、扶他林组，治疗4周后取兔右膝关节的关节软骨，取外侧胫骨平台制作石蜡切片，股骨外髁作超薄切片，剩余关节软骨作软骨细胞分离。分别进行透射电镜观察，采用流式细胞术、免疫组化、末端原位标记、原位杂交分别检测软骨细胞增殖和凋亡状况。 结果 （1）超微结构观察 三联法组软骨细胞超微结构接近正常对照组，可见细胞形态正常，细胞核呈卵圆形，染色浅，核仁清晰，内质网较多，胞膜完整，基质匀称；模型对照组细胞形态不规则，染色质浓聚，核仁消失，细胞器减少，部分内质网扩大呈囊状；其他各治疗组除可见部分内质网轻度扩大外，各组间软骨细胞超微结构相比无明显差别。（2）软骨细胞凋亡与增殖的影响 软骨细胞TUNEL免疫组化观察凋亡细胞核呈棕黄色，主要位于软骨浅层，各层均有分布。三联法组的表达最低，与其他各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）；软骨细胞PCNA免疫组化观察PCNA阳性细胞主要位于软骨浅表层，三联法组的表达最高，与其他各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）软骨细胞中bcl-2mRNA表达的影响 模型对照组、中药熏洗组、功能锻炼组、手法弹拨组、扶他林组、三联法组显著高于正常对照组（P＜0.05）；各治疗组显著高于模型对照组（P＜0.05），其中尤以三联法组最为显著（P＜0.01），但中药熏洗组、功能锻炼组、手法弹拨组、扶他林组之间无明显差异（P＞0.05）。 结论 “三联法”能延缓和减少兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡，促使软骨细胞增殖，并维持OA软骨细胞增殖和凋亡的平衡。治疗兔膝骨关节炎比单独运用中药熏洗、手法弹拨、练功疗法和外用扶他林效果更明显。

论文目录

• 一、中文摘要
• 二、ABSTRACT
• 三、缩略词表
• 四、前言
• 五、实验研究
• 实验一 “三联法”治疗兔膝骨关节炎的超微结构研究
• 实验二 “三联法”对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡与增殖影响的实验研究
• 实验三 “三联法”对兔膝骨关节炎软骨细胞中bcl-2mRNA表达的影响
• 六、研究总结
• 七、文献综述
• 综述一 现代医学对OA的研究现状及发展趋势
• 综述二 中医药学防治OA的研究进展
• 综述三 细胞凋亡研究方法的选择
• 八、致谢