中药复方多糖的优化提取及其对小鼠免疫功能的影响

论文摘要

环境恶劣和应激众多是集约化养殖场畜禽免疫力下降及疫病不断流行的主要因素，因此，提高畜禽的免疫力对于防控疾病有着重要的意义。免疫增强剂能够使免疫功能低下动物的细胞和体液免疫得到恢复和增强，具有广阔的开发和应用前景。目前临床上应用的生物性、化学性、营养性和细菌性的免疫增强剂中，很多都具有较好的佐剂活性，但也存在一些弊端，如药物残留和过敏反应等，因此筛选安全可靠、无药残、见效快的免疫增强剂成为当前畜牧业生产中急需解决的课题。中草药作为天然药物，其资源丰富、成本低廉，并且具有毒副作用小、无残留、不易产生抗药性等特点，成为免疫增强剂的首选。研究发现中草药中的多种成分可以影响机体的免疫调节，其中多糖是中药增强免疫的主要活性成分。多年来，中药化学与药理的研究多侧重于脂溶性化学成分，而忽视了中药多糖，往往将其当作杂质除去，这不仅是因为对其缺乏认识，更在于多糖的分离纯化比较困难。随着科技的发展，中药多糖的提取方法从当初的水煎剂法，发展到纤维素酶法、超声波提取法和超滤法等，各种方法的提取工艺不同，多糖的提取率也大相径庭，因此，摸索多糖高提取率的最佳工艺条件具有现实意义。本文利用正交试验设计研究了超声细胞粉碎法提取复方中药（黄芪：党参：茯苓：麦冬=4:2:2:1）多糖的最优条件，并将此最优条件下提取出的复方中药多糖配制成高、中、低三个浓度灌喂小鼠，以探讨其对小鼠免疫功能的影响及作用机理，同时，灌喂此复方中药的水煎剂作为对比，旨在研制高效、安全的中药免疫增强剂。选取200只体重相近的小鼠随机分成：生理盐水组（A组）、复方中药水煎剂（B组）、复方中药多糖低剂量组（C组）、复方中药多糖中剂量组（D组）和复方中药多糖高剂量组（E组），每组40只，每天每组0.3mL/只，连续灌喂7d。于第8d处死，进行免疫器官指数、细胞免疫、体液免疫和单核巨噬细胞吞噬指标的测定。结果显示：超声细胞粉碎法提取复方中药多糖的最优条件为：超声次数36次，超声功率为800W，料液比1:30。复方多糖提取率为6.602%，多糖含糖量为71.293%。与空白对照组和水煎剂组相比，超声细胞粉碎法最优条件下提取的复方中药多糖显著提高了小鼠的体液免疫和细胞免疫等相关参数，表明该复方中药多糖有增强小鼠免疫功能的作用。复方中药多糖高、中剂量对小鼠免疫功能的作用效果较好且基本相近，提示该复方多糖的免疫增强作用有最适浓度。从经济角度考虑，确定中等剂量为最优剂量。复方中药多糖急性毒性试验表明其毒性极低，临床应用安全，因此，本试验超声细胞粉碎法最优条件下提取的复方中药多糖作为免疫增强剂具有较大的开发和应用前景。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 主要图表
• 中英文缩写词
• 文献综述
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 中药配方
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 试验动物
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 试验动物分组
• 2.2.2 复方水煎剂的制备
• 2.2.3 超声细胞粉碎法提取复方中药多糖
• 2.2.3.1 多糖样品的前处理
• 2.2.3.2 超声波提取多糖正交设计试验
• 2.2.3.3 超声细胞粉碎法提取中药多糖
• 2.2.3.4 标准曲线的测定
• 2.2.3.5 正交试验样品多糖含量的测定
• 2.2.3.6 最优组合提取中药复方多糖组含量的测定
• 2.2.4 中药复方多糖急性毒性试验
• 2.2.4.1 小鼠灌胃给药急性毒性预试验
• 2.2.4.2 小鼠灌胃给药的最大给药量测定
• 2.2.5 单核-巨噬细胞功能的测定
• 2.2.5.1 腹腔巨噬细胞吞噬功能试验
• 2.2.5.2 碳廓清试验
• 2.2.6 细胞免疫指标的测定
• 2.2.6.1 迟发型变态反应
• 2.2.6.2 Con A 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验
• 2.2.6.3 E-玫瑰花环试验
• 2.2.7 体液免疫指标的测定
• 2.2.7.1 血清溶血素含量的测定
• 2.2.7.2 血清 IgG、IgA 和 IgM 的测定
• 2.2.7.3 血清中白介素-2 的测定
• 2.2.8 免疫器官指数的测定
• 2.2.9 血清中总蛋白、白蛋白含量的测定
• 2.3 数据处理
• 3 结果与分析
• 3.1 复方水煎剂的提取结果
• 3.2 复方多糖的提取结果
• 3.2.1 超声提取复方多糖正交试验结果及分析
• 3.2.2 标准曲线的绘制
• 3.2.3 最优组合的复方多糖组含量测定结果
• 3.3 复方中药多糖急性毒性试验结果
• 3.4 复方水煎剂和复方中药多糖对小鼠免疫性能的影响
• 3.4.1 单核-巨噬细胞功能的测定结果
• 3.4.2 细胞免疫功能指标的测定结果
• 3.4.3 体液免疫功能指标的测定结果
• 3.4.4 免疫器官指数的测定结果
• 3.4.5 血清中总蛋白、白蛋白含量的测定结果
• 4 讨论
• 4.1 超声波细胞粉碎法对植物多糖提取的影响
• 4.2 复方中药多糖对小鼠细胞免疫功能的影响
• 4.3 复方中药多糖对小鼠体液免疫功能的影响
• 4.4 复方中药多糖对小鼠免疫器官指数的影响
• 4.5 复方中药多糖对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响
• 4.6 复方中药多糖对小鼠总蛋白、白蛋白的影响
• 4.7 复方水煎剂与中药多糖的药效比较
• 4.8 提取的复方中药多糖的应用前景
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介