通过对分裂能力和端粒长度的分析研究小鼠胰岛祖细胞的存在

论文摘要

在成年胰腺中维持足够的有功能的beta细胞是调节正常血糖水平的关键,然而维持beta细胞动态平衡的机制仍然不清楚。在本研究中,我们通过检测Ki67的表达和BrdU的染色来分析细胞的增殖能力,并通过定量PCR检测端粒长度与细胞年龄的关系。研究结果表明胰岛细胞的分裂能力及端粒长度与小鼠的年龄成反比例关系,说明这两种检测可以作为胰岛发育阶段的标记。进一步研究发现,12天或4个月年龄小鼠中单个胰岛的Ki67转录水平相差可达8-32倍。同时,单个胰岛内被BrdU标记的细胞比例相差3倍左右。与此相一致,单个胰岛的端粒长度显示了1.5-3倍的差异。更重要的是,单个胰岛的Ki67转录水平与端粒长度呈显著性正比例关系,说明胰腺中的胰岛处于不同的发育阶段。在另一项研究中,通过胰管标记的方法支持了这一结论。我们还将通过检验标记滞留细胞（Label retaining cells）及单细胞分析来确认胰岛祖细胞的存在。因此,我们的实验结果提示,成年胰腺中胰岛细胞质量的维持主要是通过胰岛祖细胞或其直接后代的增殖,而不是由于已分化的beta细胞的复制来实现的。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 动物
• 2.2 主要试剂
• 2.2.1 胰岛分离纯化试剂
• 2.2.2 免疫组化试剂
• 2.2.3 主要抗体
• 2.2.4 细胞RNA提取相关试剂
• 2.2.5 反转录反应相关试剂
• 2.2.6 Real time PCR相关试剂
• 2.2.7 端粒原位杂交相关试剂
• 2.3 仪器与设备
• 2.4 技术路线
• 2.5 实验方法
• 2.5.1 动物饲养
• 2.5.2 小鼠胰岛分离
• 2.5.3 Real time PCR
• 2.5.4 SYBR Green Real time PCR 检测胰岛端粒相对长度
• 2.5.5 组织切片免疫荧光染色
• 2.5.6 BrdU 荧光免疫组化
• 2.5.7 端粒荧光原位杂交
• 2.5.8 统计学分析
• 第三章 结果与分析
• 3.1 小鼠胰岛质量分析
• 3.1.1 胰岛数量与胰岛质量相关性分析
• 3.1.2 不同大小胰岛数量分布分析
• 3.1.3 不同大小胰岛数量百分比分布分析
• 3.2 小鼠胰岛相关基因mRNA转录水平分析
• 3.2.1 混合胰岛Proinsulin-1 Ki67 p16 mRNA转录水平表达
• 3.2.2 不同大小胰岛的Proinsulin-1，Ki67 和p16 mRNA转录水平
• 3.2.3 单个胰岛Ki67 mRNA的转录水平
• 3.3 单胰岛有丝分裂能力分析
• 3.3.1 小鼠胰腺石蜡切片BrdU染色分析
• 3.3.2 胰岛冰冻切片BrdU染色分析
• 3.4 单个胰岛的端粒长度分析
• 3.4.1 验证通过实时定量PCR测定端粒长度的可行性
• 3.4.2 不同年龄小鼠的端粒长度分析
• 3.4.3 单个胰岛Ki67 与端粒长度的相关性分析
• 3.5 胰岛祖细胞的LRCs标记分析
• 第四章 深入研究
• 4.1 胰岛祖细胞的检测
• 4.2 预期结果
• 第五章 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 个人简历及发表论文
• 致谢