论文摘要
目的:喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一,主要病理类型为喉鳞状细胞癌（laryngealsquamous cell carcinoma）,占95%-99%,病因复杂且发病率呈增长趋势。人表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因位于七号染色体p13-q22区,是HER/erbB家族跨膜酪氨酸激酶受体成员之一,其信号传导途径异常可促进肿瘤细胞生长、迁移、肿瘤血管形成及抑制肿瘤细胞凋亡。本研究旨在研究喉癌中EGFR基因的扩增与表达情况;探索EGFR与喉癌的发生、发展的相关性及其临床意义,进一步阐明喉癌发生、发展的分子机理,为临床诊断与预后判断提供科学依据。方法:采用差异PCR方法检测40例喉鳞状细胞癌标本及其配对的癌旁正常组织中EGFR基因扩增情况;应用半定量RT-PCR方法分析同批标本中EGFR mRNA的表达。采用SPSS13.0软件对实验数据进行统计学分析,以判断喉癌与癌旁正常组织中EGFR基因扩增与表达的差异是否具有统计学意义,喉癌中EGFR基因扩增、表达之间的是否具有一致性;再将EGFR基因扩增、表达的结果与40例喉癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度等各项临床参数结合起来进行统计学分析。结果:1.应用UVP凝胶成像系统软件Labworks对凝胶进行拍照及积分光密度的测量。测定每个样品EGFR基因特异性扩增条带的积分光密度,以β-actin基因为内参,应用公式计算基因扩增倍数。40例癌旁对照组织EGFR基因和β-actin基因积分光密度之比的平均值＜2.0（1.75±0.24）。以基因扩增倍数＞2.0作为判断EGFR基因扩增阳性的标准,喉癌组织有13例（占32.5%）EGFR基因扩增阳性。采用SPSS13.0软件对数据进行x2检验,差异有统计学意义（x2=15.537,P＜0.005）。2.喉癌组织中EGFR基因过表达,其中肿瘤组织中EGFR mRNA的平均积分光密度值为872.356±62.340,而癌旁对照组中为346.425±57.380,采用SPSS13.0软件进行配t检验,差异有统计学意义（t=5.959,P＜0.001）。若以表达较对照升高30%作为标准,在40例喉癌标本中有29例EGFR基因过表达,占72.5%。采用SPSS13.0软件对数据进行x2检验（x2=45.490,P＜0.001）,差异有统计学意义。3.对EGFR基因扩增、EGFR mRNA过表达结果进行统计学分析,两者具有一致性。将EGFR基因扩增、mRNA过表达结果与40位患者的各项临床参数做统计学分析,结果显示EGFR基因扩增、EGFR mRNA过表达与患者肿瘤组织的分化程度及病理分期相关:喉癌组织分化程度越低,病理分期越晚,EGFR基因扩增、mRNA表达水平越高（P＜0.05）。结论:喉癌中EGFR基因在DNA水平上的扩增是EGFR mRNA过表达的原因之一,EGFR异常与喉癌的发生和发展具有相关性。临床工作中可以利用RT-PCR配合差异PCR方法检测喉癌术后标本中EGFR水平,以此作为估计喉癌病人预后的分子指标之一。此外,随着基因治疗研究和应用的深入,EGFR可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。