精子因素对不明原因反复自然流产的影响

论文摘要

背景知识:反复性自然流产(recurrent pregnancy loss,RPL)影响着约0.5～1.0%夫妇,患者遭受了极大的痛苦。导致RPL的原因很多,且有半数以上患者原因不明。目前,对RPL病因学的研究主要集中于女性,男性因素相对较少。男性配子构成胚胎基因组成分的一半,精子遗传异常可影响胚胎继续发育而导致流产。研究报道显示精子染色体非整倍体与RPL相关,采用TUNEL、吖啶橙染色法(acridineorange test,AOT)等方法分析发现不明原因反复流产(unexplainedRPL,URPL)夫妇丈夫精子DNA完整性与对照组相比有显著差异,DNA损伤明显增加。目的:进一步研究精子因素在URPL中的作用,并分析DNA完整性较差的患者可能存在的基因突变。方法:以21对URPL夫妇中丈夫为研究对象(病例组),选择20名已生育过健康后代的男性作为对照组,收集他们的精液。应用三色荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术分析精子18号、X和Y染色体非整倍体率;应用精子染色质结构分析(spermchromatin structure assay,SCSA)方法分析精子DNA完整性。并对DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)值≥27%(表示DNA完整性较差)的患者,收集其外周血并抽提gDNA,PCR扩增产物经变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)分析并结合测序检测Tnp1和Tnp2基因突变。结果:(1)、与对照组相比,URPL组精子常规参数没有差异,但正常形态率下降;DFI值增加,并有8例患者DFI≥27%,DNA完整性有显著差异,高DNA可染性(high DNA stainability,HDS)值没有差异;精子18号、性染色体非整倍体率有显著差异。(2)、突变分析结果:8例DNA完整性较差的患者,所有检测区域均呈单一正常峰型,没发现相关的突变。结论:(1)、精子形态、DNA完整性和精子染色体非整倍体是URPL的相关性因素,建议临床对这部分夫妇病因分析时进行这三项检查。(2)、结果提示DNA损伤可能是多因素性、多环节的作用过程。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英文对照简表
• 实验技术路线
• 前言
• 第一章 URPL患者丈夫精子形态、染色体非整倍体和DNA完整性分析
• 1. 对象、材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 小结
• 第二章 DNA完整性较差患者Tnp1、Tnp2基因突变分析
• 1. 对象、材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 小结
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 个人简历