淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞增殖及向心肌细胞分化的影响

论文摘要

目的:研究温阳补肾中药淫羊藿的活性成分淫羊藿苷（ICA）对体外培养的骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖及向心肌细胞分化的影响,为中药联合干细胞移植治疗心力衰竭奠定基础。方法:体外培养人MSCs,取第三代MSCs,用MTT法检测淫羊藿苷（分20ug/l、40ug/l、80ug/l、160ug/l四个浓度组）对MSCs增殖的影响。以淫羊藿苷（ICA）、5-氮杂胞苷（5-aza）及两者联合作用,作为分化诱导剂,连续观察四周,相差显微镜下观察其形态变化,免疫荧光方法检测心肌特异性肌钙蛋白I（TroponinI,cTnI）、连接蛋白43（C0nnexin43,CX43）,流式细胞技术检测心肌样细胞分化率（即cTnI、CX43表达阳性的细胞百分比）,应用半定量RT-PCR技术分析GATA-4、Nkx2-5相关调空基因在分化过程中的表达,应用Western-blotting方法从蛋白水平分析GATA-4、Nkx2-5在分化过程中的表达。结果:淫羊藿苷组吸光度（OD值）较对照组高（P＜0.01）,且淫羊藿苷浓度为80ug/l最合适。免疫荧光结果:5-aza诱导剂组和淫羊藿苷+5-aza诱导剂组均有cTnI和CX43表达,淫羊藿苷组有微弱的cTnI和CX43表达,而对照组无表达。流式细胞技术检测结果:淫羊藿苷+5-aza组表达cTnI、CX43分别为47.22%、44.43%,5-aza组表达cTnI、CX43分别为29.10%、27.15%,两组比较有统计学差异（P＜0.01）,单纯淫羊藿苷组弱表达cTnI、CX43分别为7.02%、7.69%,对照组基本不表达cTnI、CX43。半定量RT-PCR结果显示:5-aza组和淫羊藿苷+5-aza组在诱导28天后,有较强表达GATA-4、Nkx2-5,且淫羊藿苷+5-aza组表达GATA-4、Nkx2-5较5-aza组增强,淫羊藿组弱表达GATA-4、Nkx2-5,对照组均无GATA-4、Nkx2-5表达。Western-blotting结果显示5-aza组和淫羊藿苷+5-aza组在诱导28天后,有较强表达GATA-4、Nkx2-5,且淫羊藿苷+5-aza组表达GATA-4、Nkx2-5较5-aZa组增强,淫羊藿组弱表达GATA-4,无表达Nkx2-5,对照组无GATA-4、Nkx2-5表达。结论:淫羊藿苷能促进MSCs增殖。淫羊藿苷能协同5-aza诱导MSCs向心肌细胞分化,可以作为更好的促进MSCs向心肌细胞分化的条件。淫羊藿苷可能有诱导MSCs向心肌细胞分化的趋势,有待进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词表
• 第一部分 文献综述
• 综述一 骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的可塑性及临床应用研究进展
• 参考文献
• 综述二 淫羊藿苷药理作用的研究进展
• 参考文献
• 第二部分 实验研究
• 前言
• 实验一 淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 实验二 淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的影响
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 结语
• 附图
• 致谢
• 个人简历