导读:本文包含了多分化潜能论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:胰腺导管干细胞,分化,胰岛,神经细胞
多分化潜能论文文献综述
叶绍棠,严玉贤,吴江,翟岩辉,效梅[1]（2018）在《胰腺导管单克隆上皮样干细胞的多分化潜能》一文中研究指出体外诱导源于成年大鼠的胰腺导管单克隆上皮样干细胞分化形成胰岛、神经、脂肪及成骨细胞,探讨干细胞的多分化潜能。扩增培养源于成年大鼠的胰腺导管单克隆上皮样干细胞,采用不同的诱导液体外诱导其向胰岛、神经、脂肪及成骨细胞分化,并通过DTZ染色、糖刺激试验、免疫荧光反应、油红O染色、茜素红染色或Vonkossa染色的方法对分化细胞进行检测。结果显示,体外诱导培养干细胞分化形成类胰岛,DTZ染色阳性,糖刺激分泌胰岛素、C-肽;分化形成类神经细胞,表达神经元特异性烯醇化酶;分化形成类脂肪细胞,油红O染色阳性;分化形成类成骨细胞,其分泌物呈岛状矿化结节,茜素红和Vonkossa染色阳性。这表明,该源于成年大鼠的胰腺导管上皮样干细胞系具有多分化潜能。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年01期）
陶玉飞[2]（2015）在《人牙龈成纤维细胞的多分化潜能及骨形成蛋白-2和地塞米松影响其成骨能力的研究》一文中研究指出目的:研究人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,h GFs)是否具有成骨、成软骨和成脂的多向分化潜能,同时检测骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和地塞米松(dexamethasone,DEX)对体外培养的h GFs的细胞增殖活性以及成骨诱导分化的影响。方法:选择就诊于天津医科大学口腔颌面外科的志愿者(18-25岁),经志愿者知情同意后,拔除阻生齿(无龋病、无牙周病),收集术中分离的新鲜健康牙龈组织。采用组织块法提取h GFs,取第3代细胞用于实验。实验分为两部分。第一部分,培养至第3代的人牙龈成纤维细胞,进行多分化包括成骨、成软骨和成脂肪诱导分化研究,分别以DMEM(低糖)与3%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)进行培养作为对照组,分别进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红染色、阿利新蓝染色和油红O染色检测成骨、成软骨和成脂分化情况。成骨诱导培养基成分包括DMEM培养基(低糖)、3%FBS、10-2mol/Lβ-甘油磷酸钠、5 mg/L抗坏血酸、2×10-3mol/L L-谷氨酰胺以及10-7mol/L DEX;成软骨诱导培养基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、50 mg/L抗坏血酸、6.25mg/L胰岛素及10μg/L转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1);成脂诱导培养基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、10-6mol/L DEX、10-5mol/L胰岛素、0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌(3-Isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)及2×10-4mol/L吲哚美辛。第二部分,分5组培养:A组为DMEM培养组,仅使用DMEM培养基(低糖)与3%FBS进行培养;B组为基础骨诱导培养组;C组为基础骨诱导+10-7mol/L DEX培养组;D组为基础骨诱导+50μg/L BMP-2培养组;E组为基础骨诱导培养基+10-7mol/L DEX+50μg/L BMP-2培养组。MTT法检测细胞增殖活性,ALP染色、茜素红染色、逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞成骨分化情况。结果:(1)培养至7d的ALP染色结果显示成骨诱导组可见大量细胞内染色的蓝紫色沉淀,对照组无沉淀产生;培养至28d,可见成骨诱导组细胞周围有大量红染的钙结节沉积,对照组无红染的钙结节。培养至14d,成软骨诱导组阿利新蓝染色见细胞染色的蓝色沉淀,成脂诱导组细胞内可见油红O染色呈红色的脂肪滴,对照组的h GFs阿利新蓝和油红O染色均成阴性。(2)MTT结果显示:h GFs在所有培养条件下均能够稳定生长,各组细胞在相同时间的增殖活性无明显差异(P>0.05)。(3)培养至7d的细胞,碱性磷酸酶染色结果显示:A组无明显蓝紫色沉淀,B组和D组可见少量细胞染色的蓝紫色沉淀,C组和E组可见大量蓝紫色沉淀,E组染色较C组稍深。(4)培养至28d的细胞,茜素红染色结果显示:A组无钙结节形成,其它组均有大量钙结节形成,E组的钙结节量最多,其次为C组,再次是D组、B组。(5)RT-PCR结果显示:同一时间,E组的ALP、胶原蛋白I(collagen 1,Col1)、runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)表达量均为最高(P<0.0001);C组的ALP、Col1表达量仅次于E组(P<0.0001);而第21d,D组Runx2(P<0.05)。7d时,除E组外,各组Runx2表达量均无明显差异;14d时,D组Runx2表达量仅次于E组(P<0.05);21d时,C组Runx2表达量仅次于E组(P<0.05)。结论:(1)h GFs具有成骨、成软骨和成脂分化的多向分化潜能。(2)BMP-2和DEX对h GFs的细胞增殖无明显影响。(3)单独及联合应用DEX、BMP-2能够促进h GFs的碱性磷酸酶活性和钙结节的形成,两者联合的作用更强,提示两者联合能更有效地促进h GFs成骨分化。(本文来源于《天津医科大学》期刊2015-05-01）
卢泽平[3]（2014）在《人前列腺间充质干细胞的生物学特性及其多分化潜能研究》一文中研究指出引言：人类组织间充质干细胞(hMSCs, human mesenchymal stem cells)是一类非造血系的基质或间充质祖细胞,它可以自我更新并分化成为多种不同的间质组织,包括骨、脂肪、肌肉以及软骨,其中从骨髓中提取的hMSCs又叫骨髓基质细胞。近年来由于人们发现它有和胚胎干细胞类似的多分化潜能,同时在体外实验中易于提取和扩增,以及它潜在的医疗和科研价值,已经引起了研究者们广泛的关注。在本研究的实验构思中本研究相信其中前列腺基质细胞在良性前列腺增生和前列腺癌中提供了肿瘤发生、发展以及治愈过程中的生态位和细胞微环境。同时基质细胞在局部形成了一个内皮细胞、肌细胞、脂肪细胞、软骨细胞以及成骨细胞的前体池,该前体池或许包含了最原始的间充质干细胞,即本研究假设出的多潜能基质细胞人前列腺间充质干细胞(hPMSCs, human prostate-derived mesenchymal stem cells)。相对于前列腺上皮干细胞的相关研究本研究对hPMSCs它的生物特性依然比较模糊,甚至hPMSCs这一名称在内外文献中尚未见报道。这可能是由于本研究发现和分离hPMSCs的方法不同,分离后对hPMSCs的处置不同,以及hPMSCs尚无可以作为金标准的特异的细胞分子表面标志物,加之来源于不同病患和不同部位的hPMSCs自身也存在差异,最后还有研究hPMSCs分化潜能的诱导途径也不一致,导致hPMSCs这一概念由于过于混沌而尚未建立起来。因此目前国内外尚无人在这一领域发表成果。本研究的实验对象和目的正是探索和研发从人良性前列腺增生组织基质分离人类前列腺间充质干细胞的方法,从而鉴定出它们独有的生物学特性。希望通过本研究使本研究从hMSCs中衍生出“前列腺间充质干细胞hPMSCs"的概念,从而探索出一条研究前列腺肿瘤发生、诊断和治疗的途径并丰富人组织来源间充质干细胞的概念。实验目的：通过本实验本研究期待解释以下科学问题：1)证实人前列腺hPMSCs的存在并鉴定出人前列腺hPMSCs基本生物学特性。2)通过从以下各种分选方式得到的人前列腺间充质单核细胞亚群,贴壁粘附法人前列腺间充质单核细胞亚群,免疫磁珠阳性分选单一抗原CD105, CD133和CD271人前列腺间充质单核细胞亚群各自分别建立起单一纯化的人前列腺hPMSCs,同时摸索出其标准的体外培养条件。3)研究和比较各hPMSCs亚群向内胚层成骨细胞以及脂肪细胞和外胚层神经细胞分化的潜能。4)通过实验证实CD133和CD271单克隆阳性分选的hPMSCs可以作为理想的前列腺疾病研究临床和科研的种子细胞,表面抗原CD133和CD271也就是分离人前列腺间充质干细胞最有效率的表面标志物。同时为人前列腺来源的hPMSCs的培养和体外干细胞活性的维持提供实验方法和依据,为研究hPMSCs与前列腺肿瘤的发生,发展以及治疗奠定基础。材料和方法：本实验以接受了前列腺电切术后(TURP)病人增生的前列腺组织标本,所有标本的获取均得到了英国爱丁堡大学医学伦理学委员会的认证。获取的前列腺组织标本经过Percoll液(d=1.073g/m1)提取出了hPMNCs细胞混悬液之后并培养扩增到第一代之后,hPMNCs被分成了3份(3/5,1/5和1/5),其中的3/5本研究平均的分成了3份,这3份前列腺单核细胞本研究分别用CD105、CD133和CD271单克隆抗体阳性免疫磁珠进行分选,而其余的一个1/5本研究直接用粘附贴壁法分选出了PA前列腺单核细胞亚群,另一个1/5本研究直接将它培养到第叁代作为对照细胞株。通过以上的处理本研究分别获得了5个亚群的细胞,之后本研究将分选出的各细胞亚群接种在T75培养瓶内,给予完全培养基CCM (Complete Culture Medium)培养到第叁代(P3)。为了保持对照实验结果评估的一致性,本研究将所有五个前列腺间充质干细胞分选亚群(前列腺单核细胞亚群,PA前列腺单核细胞亚群以及单克隆抗体阳性CD105、CD133和CD271阳性亚群)在体外培养到第叁代(P3)。通过不同的分选流程得到了可稳定传代的以下五个细胞亚群：贴壁粘附法人前列腺间充质单核细胞亚群,免疫磁珠分选单一抗原CD105,CD133和CD271和人前列腺间充质单核细胞亚群并分别对它们的生物特性进行了系统性的研究,并同时探讨了它们在体外向内胚层成骨细胞以及脂肪细胞和外胚层神经细胞分化的潜能(通过比较各亚群茜素红S和油红0染色能力以及免疫荧光照相和PCR分析),各部分的实验方法概要如下：成纤维细胞样克隆生成单位计数(Colony forming units-Fibroblast,CFU-F)：为了测定该五个亚群间充质干细胞形成成纤维样集落克隆的能力,以上五个细胞亚群均消化后重新种植在成纤维细胞样克隆生成培养液MACS NH CFU-F Medium (Miltenyi Biotec Co, Germany, order no130-091-676)中9天并被种植在1%凝胶镀膜过的六孔板内。在第9天六孔板被以蒸馏水漂洗,之后以甲醇固定并且用结晶紫细胞染液进行大体染色同时克隆形成单位被计数统计(成纤维集落克隆形成单位的能力代表了非造血系干细胞其生长以及分化的能力)。流式细胞仪检测(Flow Cytometry,FCM):这四个细胞亚群的膜表面标志物,本研究使用BD公司生产的鼠抗人细胞膜抗体,其中特异性的间充质干细胞抗体包括CD73、CD44、CD105、CD90和CD166以及造血系干细胞膜表面标志物CD14,CD34以及CD45。总的来说本研究将1×105个细胞洗脱下来并在黑暗中在4。C孵育30mins。孵育后的细胞被重新漂洗同时使用Coulter FACS XL-MCL流式细胞仪进行检测。成骨分化诱导：为了揭示间充质干细胞成骨分化的能力本研究从以上各亚群的1×105个前列腺间充质干细胞中分别置于德国美天旎生物公司的非造血系成骨分化培养液(Miltenyi Biotec, Germany,order no.130-091-678)的6孔板中。所有这些细胞每3天换液1次并连续培养四周,本研究从第9天开始可以观察到为了评价各亚群成骨分化的能力培养板,首先以磷酸盐缓冲溶液漂洗干净之后在每孔中滴入4%多聚甲醛两mins进行固定,最终以蒸馏水洗净。培养板在茜素红染液中漂染一mins,最终以乙醇溶液清洗干净从而获得生成的磷酸钙结节(红色)并进行美国Dynex公司MRX(?)酶标仪OD值读取。成脂分化诱导：为测定以上各的亚群细胞成脂分化潜能,本研究在六孔板中分别放入1×105个洗脱下的细胞,将细胞更换非造血系成脂分化培养液(130-091-677)。所有细胞每周换液两次并连续培养四周,之后以油红将细胞中的脂滴进行染色,洗脱后以美国Dynex公司MRX(?)II酶标仪进行0D值读取比较其各组成脂分化能力。神经分化诱导：为了检测CD271单克隆抗体阳性分选亚群向神经分化的潜能,1×105个细胞被平均的种植于12孔板。同时种植后给予更换成非造血系N2B27培养液(Stem Cell Sciences Co, USA, Catalogue Number:SCS-SF-NB-02)先预培养48小时,以保证细胞对分化培养液的适应。之后本研究在更换的N2B27培养液中加入NGF(神经生长因子,30ng/m1),FGF-b(纤维母细胞生长因子-b,20ng/m1)以及RA(全反式维甲酸,0.5ug/m1)。在培养的48及72小时后将每组中的一个培养板分别进行荧光染色固定从而测它们表达GFAP以及NESTIN的表达,其表达的效率本研究通过荧光染色显微镜来观察。荧光染色处置中,本研究先将培养板以磷酸盐缓冲溶液清洗,之后使用4%的甲醛溶液中固定5mins,最终以蒸馏水漂洗干净。染色阶段,第一步细胞被固定并且用非特异性蛋白进行阻滞。第2部两个抗体被分别的加入到之上不同亚群的培养孔中。最终细胞都与荧光标记的第二级抗体共同作用30mins从而将目的基因蛋白在荧光显微镜下标识出来。实验结果：在此研究中本研究综合评价了五个细胞亚群：①未纯化的前列腺基质单核细胞hPMNCs。②粘附贴壁法分选得到的hPMSCs。③细胞表面标志物CD105阳性前列腺基质单核细胞CD105-hPMSCs。④细胞表面标志物CD133阳性前列腺基质单核细胞CD133-hPMSCs。⑤细胞表面标志物CD271阳性前列腺基质单核细胞CD271-hPMSCs。通过对以上五个细胞亚群之间以下等项目的比较：(1)细胞生长特性。(2)成纤维细胞样克隆生成单位(Colony forming units-Fibroblast,CFU-F)的效率比较。(3)对各细胞亚群间充质干细胞相关标志物表达(CD105,CD166, CD34, CD271, CD73, CD105, CD45, CD14)的测定。(4)比较以上五个细胞亚群它们成脂、成骨、成神经体外分化的潜能以及效率。结果罗列如下：免疫磁珠分选结果：经过本研究的实验证实了免疫磁珠体外纯化人前列腺间充质单核细胞中CD105,CD133和CD271阳性细胞亚群的可行性,本研究取良性前列腺增生患者前列腺电切标本并制备单细胞悬液,采用免疫磁珠分选法分选出CD105,CD133和CD271阳性细胞亚群,并在镜下使用台盼蓝细胞染色观察分选前后的细胞活力,并用流式细胞测定纯化前后CD105,CD133和CD271的阳性表达率。本研究发现通过免疫磁珠单克隆抗体分选后所得CD105细胞纯度为(97.3±1.86)%,通过免疫磁珠单克隆抗体分选后所得CD133细胞纯度为(88.3±3.06)%通过免疫磁珠单克隆抗体分选后所得CD271细胞纯度为(89.5±1.8)%。纯化前后的间充质细胞活力无统计学差异(P>0.05)。因此本研究得出结论,应用CD105,CD133和CD271作为hPMSCs的分子表面标志及德国美天旎生物公司(Miltenyi Biotec Co, Germany)的免疫磁珠分选系统可从人良性前列腺增生患者前列腺电切标本直接分选得到高纯度的CD105,CD133和CD271阳性前列腺间充质干细胞,同时该分选系统处理的细胞活力在分选中不受影响。通过显微镜下细胞形态学观察：本研究分选出的5个hPMSCs前列腺间充质干细胞亚群均具有人类组织间充质干细胞基本的生物学特性,在显微镜下大多数细胞呈现小梭形,核仁明显,其中细胞核较大,而且混杂的扁平的细胞极少。本研究在体外给予10%胎牛血清FBS加α-MEM培养,在细胞生长到80%融合时传代,其各亚群细胞在体外传代35pd,生长状态仍然良好。当细胞融合接近100%时呈现旋涡状或平行排列。本研究取第叁代的hPMSCs来绘制细胞生长曲线,经计算其对数生长期倍增时间约为26±2.3小时。成纤维细胞样克隆生成单位结果：本研究将分选出的五个前列腺间充质干细胞亚群分别培养在六孔板内,用德国美天旎生物公司非造血系成纤维细胞样克隆生成培养液培养9天。结果本研究观察到免疫磁珠分选得到的CD271和CD133阳性亚群获得了最多的成纤维细胞样克隆生成单位(Colony forming units-Fibroblast, CFU-F)数,分别是51±7.31and76±10个集落生成,它们的克隆集落数与MNC相比多了3倍以上而且CD271和CD133它们的融合速度也远远快于其他叁个细胞亚群。流式细胞术结果：本研究分选出的hPMSCs高表达间充质基质细胞表面标志而不表达造血系的表面标志。流式细胞仪检测体外扩增第3代的细胞,结果显示它们均不表达CD14,CD45,而高表达CD73,CD90,CD105,CD166,以及表达基质细胞的分子标志CD44,不表达造血干细胞的分子标志CD34,也不表达CD45和CD14。hPMSCs成骨和成脂分化：本研究取P3代的各亚群hPMSCs细胞在德国美天旎生物公司(Miltenyi Biotec Co,Germany)的成脂和成骨分化液中分别培养28天和9天后观察其内的脂滴和该结节形成并且通过油红0和茜素红染色后洗脱进行定量比较,本研究发现结果和它们的增殖能力一致,CD271和CD133亚群的成脂和成骨能力远高于其他叁个亚群。在本研究的实验中CD271阳性免疫磁珠分选hPMSCs亚群可在体外诱导分化为外胚层的神经干细胞和神经胶质细胞。体外诱导神经细胞的条件是N2B27培养液中添加3Ong/ml的β-NGF,20ng/ml的FGF-b和0.5ng/ml的RA。在培养48小时后细胞形态学发生改变,一些细胞的胞质收缩,细胞体内向外伸出双极和多极的长突出。在有些细胞中可以观察到生长锥以及丝突样的结构,免疫组化荧光结果显示分化后的细胞表达神经祖细胞特异性的标志物GFAP和Nestin。本研究应用荧光抗原标记的方法通过免疫荧光显微镜观察到GFAP和Nestin荧光染色阳性细胞,同时通过聚合酶链式反应PCR(Polymerase Chain Reaction)发现神经分化细胞表达GFAP和Nestin,以上这些细胞形态学改变和免疫检测结果表明本研究培养的hPMSCs同样可以在合适的条件下分化成为神经胶质细胞和神经元细胞。同时本研究观察到经过以上诱导出的神经细胞在两周后仍然有60%以上的存活率。本研究使用PCR的方法研究在新鲜获得的CD271阳性免疫磁珠分选亚群成神经分化后表达神经祖细胞早期的特异性标志物(Nestin)和晚期特异性标志物(GFAP)的水平,本研究发现在CD271阳性亚群中CD271和以上两个特异性标志物均有表达而且有价值的是这两个标志物在对照组(未分化组)中均无表达。总之本研究所获得的前列腺间充质干细胞在体外诱导条件具有向内胚层成骨细胞以及脂肪细胞和外胚层神经细胞分化的潜能。综合实验的结果证实本研究培养的前列腺间充质细胞可以被称为前列腺间充质干细胞(hPMSCs)。1)在液氮冻存12个月后复苏测试,冻存的HphMSCs生长状态良好,镜下是均一的小梭形CFU-F显示克隆形成能力仍然很高。2)它们高表达间充质干细胞的各细胞表面分化抗原,而且不表达造血系干细胞的细胞表面分化抗原。3)它们在体外诱导条件可以向内胚层成骨细胞以及脂肪细胞和外胚层神经细胞分化的潜能(通过比较各亚群茜素红S和油红0染色的能力)。由于以上叁项均符合本研究对于人组织间充质干细胞的要求,所以本研究认为本研究得到的前列腺基质提取细胞可以被称为前列腺间充质干细胞(hPMSCs).统计学处理：所有细胞增殖的数据,细胞克隆形成单位,以及相关抗体阳性表达率,0D值读数本研究均通过均数加减标准差x±s进行纳入。各细胞亚群之间的不同本研究进行学生T检验,多组均数间比较进行单因素方差分析,其中方差不齐数据进行非参数检测。所有的统计学分析结果应用SPSS11.5统计软件进行分析(芝加哥,美国)。P<0.05被认为有统计学意义。结论和讨论：本研究第一次综合利用了hPMSCs的密度离心法获得了前列腺间充质单核细胞hPMNCs,利用贴壁生长特点获得了贴壁粘附法人前列腺间充质单核细胞亚群PA-hPMSCs,用改进了的免疫磁珠分选法建立了单一纯化的人前列腺间充质干细胞hPMSCs细胞系,免疫磁珠分选CD105,CD133以及CD271单克隆阳性细胞亚群,这五个细胞亚群在体外可以长期稳定增殖并保持分化潜能。本研究的实验结果第次证实了在人前列腺中同样存在人类组织间充质干细胞,它的生长特性类似骨髓干细胞和胎盘干细胞。而且本研究得到的前列腺hPMSCs在经过多次传代或者长期冻存后依然可以维持他旺盛的生长并依然可以分化成神经细胞、成骨细胞和脂肪细胞。至今最常用最经典的是Friedenste.A.J.(1970)和Gronthos.S.(2003)等研究者在体外培养的一些贴壁粘附法分离出的基质细胞可以有克隆集落样生长即可以获得成纤维细胞样克隆生成单位(Colony forming units-Fibroblast, CFU-F),通过进一步研究他们发现这样获得的细胞是混杂细胞系,其中只有一部分从克隆株团中针挑出的培养细胞可以有间充质干细胞杨的多分化潜能,即PA-hPMSCs.就像其他提纯法获得的间充质干细胞,通过粘附贴壁法只可以从人组织中分理出比较混杂的包含间充质干细胞的多个细胞系,通过对这一经典方法获取的细胞和其他分选方式得到的细胞亚群的对比试验本研究期待了解它的基本生物特征。在本研究我们一一比较了对不同分选机制下得到的五个hMSCs亚群不同的增殖活性和分化潜能,本研究的数据揭示了应用不同的分选机制得到的前列腺hMSCs表达不同的生长能力、分化潜能以及不同水平的分化抗原表达,通过阳性分选机制得到的CD271和CD133亚群它们的克隆形成能力是其他亚群的叁倍,而且它们的增殖速度也远远快于其他叁个亚群,这一可能的机制是因为这两个细胞亚群中细胞的异质性最低,细胞谱系比较单一,这一建议干细胞的活性也许有可能会被其他混杂细胞所抑制。同时低密度种植对于间充质干细胞的增殖很有好处揭示也许细胞过早的融合会导致接触抑制。但在培养过程中本研究发现与初始P0代提纯的CD271单克隆抗体阳性分选亚群和CD133单克隆抗体阳性分选亚群,它们中CD271和CD133的表达在传到第叁代的时候将会大量丢失。可能的解释是CD271和CD133阳性分选细胞可以通过分化出CD271和CD133阴性细胞得以保存自身的干细胞活性。通过本研究在体外长期培养获得的数据本研究发现CD271单克隆抗体阳性分选亚群和CD133单克隆抗体阳性分选亚群包含有最少的造血系细胞混杂,通过CD45的流式细胞仪检测发现其表达最低的阳性率(分别为1.66%和2.17%)。而CD105相对HPMNC和PA-hPMSCs有中间水平的CD45表达(4.39%),也许这种CD45的低表达可以解释CD271单克隆抗体阳性分选亚群和CD133单克隆抗体阳性分选亚群在本研究中最高的增殖活性和分化潜能。综合以上两点因此本研究认为作为人前列腺间充质干细胞理想的分离和鉴定表面标志物是应该能最大程度的代表那些极少存在于基质中的同时又基本上不表达造血系细胞表面标志物的那些多潜能干细胞,本研究的研究结果表明通过免疫磁珠单克隆富选下的CD271和CD133表达阳性亚群是所有目前已知选项中拥有最强自我增殖能力和分化能力的前列腺间充质干细胞亚群。作为前列腺间充质干细胞研究的前沿对干细胞分选和培育的金标准的建立迫在眉睫,本研究的研究展示了对于人前列腺间充质干细胞从人的阳性前列腺增生良性术后标本这一免疫磁珠为基础的目的基因标志分选方法是可行的,本研究的数据显示CD271即低亲和力神经生长因子受体(Low affinity nerve growthfactor receptor,LNGFR)以及CD133可以作为可行的分选标志物来富集人前列腺间充质干细胞。在最后本研究所使用的这项方法亦可完全被复制到分选前列腺癌间充质干细胞中去。本研究同样显示了通过CD133和CD271单克隆阳性分选的hPMSCs可以作为理想的前列腺疾病研究临床和科研的种子细胞,并为人前列腺hPMSCs的培养和体外干细胞活性的维持提供了实验方法和依据,为研究hPMSCs与肿瘤研究奠定了基础。(本文来源于《兰州大学》期刊2014-05-01）
查承沁,杜建霖,翁敏杰,高凌志,汪浩[4]（2013）在《基因谱系示踪揭示Tbx18~+祖细胞的多分化潜能》一文中研究指出为探讨Tbx18+祖细胞在小鼠生长发育过程中的多分化潜能及分化的组织类型,本工作建立了Tbx18:Cre/Rosa26RLac Z谱系示踪小鼠.该示踪小鼠基于Cre-LoxP系统,能够准确及有效地示踪Tbx18+祖细胞的分化命运,通过整体胚胎及组织X-gal染色,检测分析报告基因LacZ在其中的表达情况.结果显示,在Tbx18:Cre/Rosa26RLac Z双杂合小鼠胚胎发育早期,报告基因LacZ主要在脊柱、四肢及心外膜表达;而在胚胎发育晚期则分别表达于皮肤、毛囊、肾脏、输尿管、膀胱、睾丸、输精管、椎间盘、肋软骨、心耳、心肌、冠状动脉.结果阐明,Tbx18+祖细胞在小鼠生长发育过程中具有强大的多器官及组织分化潜能,包括分化形成表皮系统,泌尿生殖系统,骨骼系统,心血管系统,并在其生长发育中发挥重要作用.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2013年11期）
王瑶[5]（2013）在《毛囊干细胞的多分化潜能及其向汗腺细胞分化的实验研究》一文中研究指出干细胞(stem cells)维持着生命体组织器官的发生发展以及损伤的修复与再生,随着近年来再生医学的迅猛发展,干细胞治疗在临床中的应用日益广泛,疗效显着,已成为很多难治性疾病的终极治疗手段,干细胞的研究已经成为全国乃至全世界的研究热点。在下文中我们将以毛囊干细胞这一成体干细胞为研究主体,对其生物学特性及其在再生医学中的应用进行研究实验,以期证明毛囊干细胞为再生医学干细胞治疗的理想干细胞源。实验目的：1.体外分离培养并扩增毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs),建立一种快速高效的细胞培养体系,为后续试验奠定基础；2.通过体外诱导实验,将HFSCs定向诱导为皮脂腺细胞及表皮角质形成细胞,验证HFSCs的多分化潜能；3.证实HFSCs经过特殊共培养体系诱导后,可以分化为汗腺样细胞(sweat gland cells,SGCs),并可参与汗腺(sweat gland,SG)的修复与再生；4.以HFSCs为种子细胞构建结构和功能更趋于完整的组织工程全层皮肤。实验方法：1.分别用“酶消化-毛囊剥离-直接种植法”及“酶消化-毛囊剥离-酶消化”两种方法体外分离HFSCs,并将毛囊组织或细胞植入铺有IV型胶原,以丝裂霉素C处理过的成纤维细胞为饲养层的transwell双层细胞培养板中,观察对比两组中细胞的形态、生长特性、及体外扩增能力的异同,并通过CD200、CD29、CK15等HFSCs特异性标记物的免疫细胞化学染色、免疫细胞荧光染色及流式细胞技术,分析、鉴定分离培养的HFSCs;2.分别建立两种不同的体外细胞诱导体系,将HFSCs分别诱导分化为皮脂腺细胞、表皮细胞,并通过皮脂腺细胞及表皮细胞特异性标记物的免疫细胞化学、免疫细胞荧光染色及脂质的油红O染色,对诱导后细胞进行表型分析与鉴定；3.体外分离培养人手掌或脚掌来源的SGCs及真皮间充质干细胞(dermal mesenchymal stem cells,d-MSCs),利用transwell细胞培养板建立了一种特殊的HFSCs共培养体系,主要由热休克的SGCs及一种仿真皮结构的间质组织构成,我们又称之为间质饲养层(mesenchymal feeder layer, M-FL)主要包括d-MSCs、 Matrigel基质胶以及一定比例的优质胎牛血清(FBS),同时设立两个对照组,对照组1中不包含热休克SGCs,对照组2中不包含M-FL；细胞经过诱导后,应用免疫细胞化学,免疫细胞荧光染色及流式细胞技术对诱导后细胞进行SGCs表型鉴定,对比实验组、对照组1、对照组2中细胞的表型变化情况,同时,通过台盼蓝拒染实验观察各组细胞的生长活性,Edu(5'-ethynyl-2'-deoxyuridine)标记技术对比分析各组中细胞的增殖能力；4.体外建立裸鼠脚掌烫伤模型,将HFSCs诱导来源的汗腺样细胞(induced-sweat gland cells, i-SGCs)移植到裸鼠脚掌的烫伤部观察,并以等量Nacl注射作为对照组,4周后,愈合创面全层皮肤取材,汗腺特异性标记物癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)、细胞角蛋白14(cytokeratin14, CK14)的免疫组化及免疫荧光染色分析判断,观察接受细胞移植的创面皮肤中是否有新生的汗腺结构存在；5.蛋白印迹法(western bolt)、反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)及实时荧光定量PCR (real-time fluorescent quantitative PCR)检测分析HFSCs诱导前、后的外胚层发育不良(ectodermal dysplasia,EDA)基因及其受体(ectodermal dysplasia receptor,EDAR)的基因及蛋白表达的变化,以进一步探索HFSCs分化为SGCs的分子机制；6.分别以HFSCs (A组),表皮干细胞(epidermal stem cells,ESCs)(B组)为种子细胞体外建立组织工程学全层皮肤,通过伊红-苏木素(hematoxylin-eosin staining, HE)染色分析两组标本形态结构的异同,观察A组标本中是否有毛囊样结构形成；两组标本分别进行integrin β1(CD29)、细胞角蛋白19(cytokeratin19, CK19)免疫组织化学染色,观察阳性细胞分布多少及分布区域。实验结果：1.“酶消化-毛囊剥离-直接种植法”及“酶消化-毛囊剥离-酶消化”两种细胞分离方法对比结果显示：应用前一种方法培养的第一代细胞生长至80-90%融合的时间为13～14天,而后一种方法为8～9天,但是传代后,从第二代细胞开始,两组细胞的生长速度及增殖能力无明显差异,无统计学意义(p>0.05)2.经过特异性微环境的诱导,HFSCs分别被诱导分化为上皮膜抗原(EMA)及油红染色阳性的皮脂腺细胞,以及细胞角蛋白10(cytokeratin10, CK10)阳性的角质形成细胞；3.在HFSCs汗腺化诱导实验中,实验组中,有一部分HFSCs最终被定向诱导分化成为具有汗腺表型的细胞,对比之下,对照组1中没有细胞分化为SGCs.对照组2中只有极少部分细胞发生了向SGCs的转化；我们利用细胞的特异性标记物,通过免疫荧光染色及流式细胞技术鉴定诱导后细胞,发现在这些细胞中HFSCs特异性标记物CD200、CD29及CK15的表达变弱了,而汗腺细胞特异性标记物CEA和CK14的表达却增强了,这说明HFSCs在设计的共培养微环境中可以实现向SGCs的分化；4. western blot结果显示分化而来的SGCs高表达EDA和EDAR,RT-PCR及实时荧光定量PCR分析显示EDA基因及EDAR基因在诱导后SGCs中呈高表达状态；而CD29、CD200等HFSCs特异性抗原基因在汗腺化诱导后表达降低；5.在随后的细胞移植实验中,接受了细胞注射的裸鼠烫伤脚掌的愈合创面,我们发现了类似SG的新生结构,进而行SGCs特异性标记物的免疫组织化学染色及免疫荧光染色,结果显示这些类似汗腺的结构对CEA、CK14呈阳性表达,而在Nacl注射组的创面标本中,没有发现这种类汗腺结构的存在。6.在以HFSCs为种子细胞的A组及以ESCs为种子细胞的B组标本中,HE染色结果显示,两组标本均由表皮和真皮组成,二者之间以基底层相连接,基底层细胞排列较为整齐,细胞偏大,有CK19+和CD29+细胞散在分布；两组间标本对比显示：A组标本中,表皮层相对于B组较厚,分层较多,而且部分标本在基底层下方有毛囊样结构形成,表皮与真皮结合较紧密；B组标本对比A组来说,表皮层较薄,分层较少,表皮真皮易分离,基底层附近CK19+和CD29+阳性细胞较A组标本少,基底层下浅真皮层中无毛囊样结构形成实验结论：1. HFSCs可以在体外适宜的微环境中被分离、培养、扩增；其中“酶消化-毛囊剥离-酶消化”法较“酶消化-毛囊剥离-直接种植”法缩短了原代细胞的培养时间,在实验中更具优势；2. HFSCs具有多分化潜能,可以在体外被诱导分化为皮脂腺细胞及表皮角质形成细胞；3. HFSCs可以在适宜的微环境中,被诱导分化为SGCs; HFSCs作为一种成体干细胞,有用于治疗汗腺缺失的潜能；我们建立的共培养诱导体系可以有效的将HFSCs定向诱导分化为SGCs,其分子机制与EDA/EDAR基因的激活有关；诱导分化而来的汗腺细胞是有功能的,可以参与皮肤创面中汗腺的再生；4.以HFSCs为种子细胞有望构建出富含皮肤附属器的,形态、结构、功能更趋于完善的组织工程全层皮肤。(本文来源于《南开大学》期刊2013-05-01）
王丹丹[6]（2008）在《BMSCs多分化潜能鉴定、向肝细胞分化、体外标记和MR活体示踪研究》一文中研究指出目前,关于肝脏组织损伤后,如何使肝细胞再生和肝功能恢复是人们一直非常关注的课题,也是临床治疗中遇到的难点。利用干细胞移植和干细胞工程肝细胞来治疗肝组织损伤,促使肝细胞再生以及改善肝功能等日益受到人们重视。本研究主要采用具有多分化潜能的骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向肝细胞进行定向诱导分化,获得肝样细胞,为干细胞移植提供可靠的种子细胞来源;同时,通过细胞标记,研究移植后的细胞迁移及MRI活体示踪,为MRI动态观察建立一个良好的标记方法和技术平台。目的:用本实验室建立的大鼠BMSCs培养方法,分离、培养和纯化大鼠BMSCs,对BMSCs进行多分化潜能鉴定,检测BMSCs表面抗原;体外诱导分化为肝样细胞后进行免疫细胞化学和RT-PCR方法检测,鉴定肝细胞特异性标志物;将标记的肝样细胞经门静脉移植、肝内移植入CCl_4肝损伤大鼠肝脏,利用MR影像系统进行细胞移植后的动态观察,探讨细胞移植前后信号变化及变化规律,活体显示标记肝样细胞的特异性及敏感性,为细胞移植临床治疗提供可靠的理论依据。方法:采用全血培养法和密度梯度离心法,经传代和控制消化时间得到纯度较高的BMSCs;传代后用免疫化学法检测其表面抗原;用成脂诱导和成骨诱导的方法鉴定多分化潜能,用损伤肝组织和血清作为诱导剂定向诱导分化BMSCs,利用免疫细胞化学和RT-PCR等方法对MSCs和诱导后肝样细胞进行细胞特异性标志物的检测;利用CCl_4肝损伤模型鼠,经门静脉、肝实质移植标记的肝样细胞,采用MRI技术对大鼠肝脏进行活体扫描,然后进行统计学分析。结果:利用本实验室的方法获得了高纯度贴壁生长的BMSCs呈均匀分布的集落样生长,呈梭形或纺锤形,细胞传代稳定,随传代次数增加纯度提高。传代培养第3代BMSCs经免疫细胞化学检测CD105呈阳性;传代培养BMSCs诱导分化后,油红O结合苏木素染色结果显示细胞核呈浅兰色,胞浆内有橘红色脂肪滴出现,显示为脂肪细胞;BMSCs诱导分化后,ALP染色显示细胞内有致密颗粒形成,矿化结节染色结果显示BMSCs经诱导后有很好的成骨能力。诱导BMSCs向肝细胞分化实验显示:白蛋白呈阳性,糖原染色阳性,可表达肝脏特有的基因AFP、ALB。标记的肝样细胞体外MRI成像显示,在T1W,T2W序列均可见信号改变;标记的肝样细胞移植入大鼠肝脏后,采用MRI技术对大鼠肝脏进行扫描:对照组在移植前肝脏均未见明显的异常低信号区;门静脉组大鼠移植后24h内在肝右叶可见明显信号改变;肝内注射组大鼠移植后24h内同样出现信号改变。1W后MRI仍能检测到信号改变。结论:(1).利用本实验室建立的方法,可获得高纯度贴壁生长的BMSCs。在体外可以实现大量扩增;(2).培养的BMSCs可表达表面抗原CD105,具有分化为脂肪细胞,成骨细胞的能力,证明BMSCs具有多分化潜能;(3).利用本实验室建立的方法,可诱导BMSCs分化为肝样细胞;(4).标记的肝样细胞在体内、体外均可引起MRI信号的明显改变,可进行较长时间的MRI动态观察,有较好的特异性和灵敏度。(本文来源于《吉林大学》期刊2008-04-15）
崔苏萍,李悦,谢安,汪泱,娄远蕾[7]（2007）在《大鼠真皮多能干细胞分离培养及其多分化潜能特性》一文中研究指出目的建立分离培养大鼠真皮来源多能干细胞(SKPs)的方法并探讨其生物学特性。方法0.25%中性蛋白酶(protease)选择性的消化表皮与真皮的细胞连接,剥离真皮,采用0.25%的胰蛋白酶消化真皮层细胞于超低黏附培养板中进行悬浮无血清培养,机械法传代,免疫荧光染色法检测细胞表面分子的表达,体外诱导其向脂肪细胞分化,研究其多分化潜能。结果体外培养2～3d后真皮多能干细胞聚集成球悬浮生长,培养4代后去除生长因子后并添加血清培养,细胞帖壁生长,呈长梭形成纤维样,免疫荧光染色显示,体外培养的真皮多能干细胞可表达CD29和Nes- tin,不表达CD34与vimentin。体外诱导实验结果显示体外培养的真皮多能干细胞能够被诱导成脂肪细胞,油红染色阳性。结论采用悬浮培养方法可成功分离培养大鼠真皮多能干细胞,培养的细胞可表达神经干细胞标志并具有多分化潜能。(本文来源于《中华实验外科杂志》期刊2007年08期）
王玲,徐秋岚,苗宗宁,祝建中,黄伟[8]（2007）在《胎盘多分化潜能细胞的体外分离培养(英文)》一文中研究指出背景:一些研究提示,胎盘可以作为一种新的间充质干细胞来源。胎盘组织中分离出的贴壁细胞与骨髓间充质干细胞有相似形态和细胞表面标志,具有分化为成骨细胞以及神经细胞的能力。目的:探索一种新的获取间充质干细胞的来源及方法。设计:观察性实验。单位:无锡市第叁人民医院。材料:胎盘(我院妇产科剖腹产手术中胎盘,经家属同意并经院伦理委员会通过签署知情同意书)。培养基;sABC试剂盒、DAB显色试剂盒;羊抗鼠-FITC;重组人碱性成纤维细胞生长因子;兔抗人神经元特异性烯醇化酶;兔抗人胶质纤维酸性蛋白。方法:实验于2005-05/2006-08在无锡第叁人民医院细胞与分子生物学研究室完成。消化胎盘实体组织,贴壁培养细胞,观测形态,绘制出各代PDMCs的生长曲线。取原代培养细胞1和7d时的上清液,用化学发光法测定β-HCG含量。检测细胞表面抗原表达以及分化潜能。培养细胞在诱导分化24h(神经细胞),2周(成骨细胞)后采用常规方法免疫细胞化学染色。显色后在常规显微镜或荧光显微镜下观察。主要观察指标:①形态学以及生长曲线的观察;②多分化潜能细胞培养上清液β-HCG测定、流式细胞仪检测多分化潜能细胞抗原表达;③多分化潜能细胞诱导分化和诱导分化后细胞免疫组织化学分析。结果:①多分化潜能细胞的原代培养情况:胎盘组织消化后获得细胞中仅有少量的贴壁细胞,经两周后逐渐形成扁平单层细胞,呈漩涡状生长或成簇生长,随着细胞密度的增加,胞体变得细长,形态类似成纤维细胞。②多分化潜能细胞的生长曲线分析结果:细胞在接种后的2～8d为生长的潜伏期,细胞逐渐开始出现贴壁,无明显扩增;8d以后细胞进入对数生长期,此时细胞增殖活跃,相差显微镜下观察细胞突起向周围伸展,出现两个核细胞分裂相的间充质干细胞多见,细胞密度增大,彼此相连;11～14d,生长曲线逐渐进入平台期,MSCs铺满瓶底,细胞扩增趋缓,原代培养结束。③β-HCG测定结果:两个时间点培养上清液中均未检测到β-HCG表达。④多分化潜能细胞的表面抗原特性:多分化潜能细胞表达CD29,CD44和CD105,不表达CD34,CD45,CD19和CD106。⑤多分化潜能细胞的诱导分化结果:向神经细胞诱导24h后,细胞形态明显改变,胞体回缩,胞核部分折光性增强,出现类似于树突及轴突样结构,染色可见神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白阳性。结论:胎盘组织中含有的多分化潜能细胞与骨髓间充质干细胞形态功能相似,胎盘可以作为获取间充质干细胞的一种有效来源。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2007年24期）
王文加,焦平,许天敏,范伟全,张诺[9]（2007）在《脂肪来源基质细胞的扩增及多分化潜能研究》一文中研究指出目的建立人脂肪来源的基质细胞(ADSCs)的分离和扩增方法,探讨ADSCs的多向分化潜能。方法采用胶原酶消化法分离扩增人ADSCs,测定其生长的经时变化、累积生长倍数等;应用不同因子诱导ADSCs向脂肪细胞及神经元样细胞分化并进行鉴定。结果每100ml脂肪抽吸物中可分离得到2×107~4×107个有核细胞,60d内扩增至P8;油红O染色、免疫细胞化学染色及RT-PCR证实ADSCs经诱导可分化为脂肪细胞及神经元样细胞。结论建立了ADSCs的扩增培养方法,扩增培养的ADSCs具有旺盛的增殖能力,并且具有向脂肪细胞及神经元样细胞分化的潜能。有望作为一种成体多能干细胞应用于组织工程及细胞治疗。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2007年05期）
苗宗宁,祝建中,黄伟,王新,张学光[10]（2006）在《体外分离培养胎盘多分化潜能细胞的实验研究》一文中研究指出目的探索一种新的获取间充质干细胞(m esem chym al stem cells,MSCs)的来源及方法。MSCs在成人骨髓内含量极低,数量随着年龄的增长而减少。MSCs同时少量出现于外周血以及脐带血、胎儿组织器官内,然而,胎儿组织样本难以获取,脐带血中含量太低。这样,如何获得合适的MSCs来源以建立稳定的培养体系,同时避免伦理道德问题的约束是一个值得探索的课题。方法消化胎盘实体组织,贴壁培养细胞,观测形态并检测其细胞表面抗原表达以及分化潜能。结果胎盘组织中分离出的贴壁细胞与骨髓间充质干细胞有相似形态和细胞表面标志,具有分化为成骨细胞以及神经细胞的能力。结论胎盘组织中含有的多分化潜能细胞(p lacenta-derived mu ltipotent cells,PDMCs)与骨髓MSCs形态功能相似,胎盘可以作为获取MSCs的一种有效来源。(本文来源于《中国微循环》期刊2006年01期）
多分化潜能论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,h GFs)是否具有成骨、成软骨和成脂的多向分化潜能,同时检测骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和地塞米松(dexamethasone,DEX)对体外培养的h GFs的细胞增殖活性以及成骨诱导分化的影响。方法:选择就诊于天津医科大学口腔颌面外科的志愿者(18-25岁),经志愿者知情同意后,拔除阻生齿(无龋病、无牙周病),收集术中分离的新鲜健康牙龈组织。采用组织块法提取h GFs,取第3代细胞用于实验。实验分为两部分。第一部分,培养至第3代的人牙龈成纤维细胞,进行多分化包括成骨、成软骨和成脂肪诱导分化研究,分别以DMEM(低糖)与3%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)进行培养作为对照组,分别进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红染色、阿利新蓝染色和油红O染色检测成骨、成软骨和成脂分化情况。成骨诱导培养基成分包括DMEM培养基(低糖)、3%FBS、10-2mol/Lβ-甘油磷酸钠、5 mg/L抗坏血酸、2×10-3mol/L L-谷氨酰胺以及10-7mol/L DEX;成软骨诱导培养基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、50 mg/L抗坏血酸、6.25mg/L胰岛素及10μg/L转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1);成脂诱导培养基成分包括DMEM(低糖)、3%FBS、10-6mol/L DEX、10-5mol/L胰岛素、0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌(3-Isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)及2×10-4mol/L吲哚美辛。第二部分,分5组培养:A组为DMEM培养组,仅使用DMEM培养基(低糖)与3%FBS进行培养;B组为基础骨诱导培养组;C组为基础骨诱导+10-7mol/L DEX培养组;D组为基础骨诱导+50μg/L BMP-2培养组;E组为基础骨诱导培养基+10-7mol/L DEX+50μg/L BMP-2培养组。MTT法检测细胞增殖活性,ALP染色、茜素红染色、逆转录多聚酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞成骨分化情况。结果:(1)培养至7d的ALP染色结果显示成骨诱导组可见大量细胞内染色的蓝紫色沉淀,对照组无沉淀产生;培养至28d,可见成骨诱导组细胞周围有大量红染的钙结节沉积,对照组无红染的钙结节。培养至14d,成软骨诱导组阿利新蓝染色见细胞染色的蓝色沉淀,成脂诱导组细胞内可见油红O染色呈红色的脂肪滴,对照组的h GFs阿利新蓝和油红O染色均成阴性。(2)MTT结果显示:h GFs在所有培养条件下均能够稳定生长,各组细胞在相同时间的增殖活性无明显差异(P>0.05)。(3)培养至7d的细胞,碱性磷酸酶染色结果显示:A组无明显蓝紫色沉淀,B组和D组可见少量细胞染色的蓝紫色沉淀,C组和E组可见大量蓝紫色沉淀,E组染色较C组稍深。(4)培养至28d的细胞,茜素红染色结果显示:A组无钙结节形成,其它组均有大量钙结节形成,E组的钙结节量最多,其次为C组,再次是D组、B组。(5)RT-PCR结果显示:同一时间,E组的ALP、胶原蛋白I(collagen 1,Col1)、runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)表达量均为最高(P<0.0001);C组的ALP、Col1表达量仅次于E组(P<0.0001);而第21d,D组Runx2(P<0.05)。7d时,除E组外,各组Runx2表达量均无明显差异;14d时,D组Runx2表达量仅次于E组(P<0.05);21d时,C组Runx2表达量仅次于E组(P<0.05)。结论:(1)h GFs具有成骨、成软骨和成脂分化的多向分化潜能。(2)BMP-2和DEX对h GFs的细胞增殖无明显影响。(3)单独及联合应用DEX、BMP-2能够促进h GFs的碱性磷酸酶活性和钙结节的形成,两者联合的作用更强,提示两者联合能更有效地促进h GFs成骨分化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
多分化潜能论文参考文献
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